本文以南林895杨为试验材料,通过农杆菌介导法,利用构建的可去除选择标记载体PX6-GFP和PX6-CpTI,开展杨树无选择标记遗传转化的研究,分析转化效率和选择标记基因去除效率,旨在为培育无选择标记基因的转基因杨树提供试验依据,主要进展如下:1.构建了可去除选择标记基因的植物表达载体PX6-CpTI。通过PCR扩增获得载体pFZY1上的抗虫基因CpTI,经测序验证和分析后,利用可去除选择标记载体系统PX6,构建植物表达载体PX6-CpTI。2.获得南林895杨转基因植株。通过农杆菌介导的优化的遗传转化体系,利用可去除标记载体PX6-GFP和PX6-CpTI,开展南林895杨遗传转化研究。经统计,共获得PX6-GFP Km抗性植株51株,其中26株PCR检测呈阳性;获得PX6-CpTI Km抗性植株11株,其中6株PCR检测呈阳性。3.诱导去除选择标记基因。选取PCR检测呈阳性的部分转基因植株,将其置于含有5μM诱导物β-雌二醇的生根培养基上,同时每隔3d向植株喷洒诱导液(1/2MS+β-雌二醇5μM),持续30d。4.选择标记基因的去除效率分析。对诱导后的转基因植株采用PCR、DNA测序、GFP荧光检测等方法进行分析,证实了选择标记基因已在杨树转基因植株上被去除。在21棵转基因植株中,检测出已去除选择标记的转基因植株1棵,另有1棵为部分去除。5.转基因植株标记基因去除后对Km敏感性测定。通过对转基因植株诱导前后其叶盘对Km敏感性的对比试验,发现经诱导去除标记基因后,转基因植株叶盘对Km的敏感性与对照叶盘(未转基因植株)基本一致,表明可以使用Km筛选体系进行杨树转基因的多次转化。