目的:外界环境变化对女性妊娠可能会产生不可逆的影响。在妊娠过程中,女性子宫内膜作为胚胎着床的“基础”起着不可或缺的作用,而基质细胞蜕膜化是重要过程之一。因此,研究环境有害物质对子宫内膜基质细胞蜕膜化及妊娠结局的影响及相关机制,将有利于促进人类的生殖健康。染发已经成为人类生活的重要部分,有流行病学分析提示其是肿瘤发生的高危因素。对苯二胺是工业着色剂的主要成分之一,也是各种染发剂的主要组成物质。对苯二胺通过皮肤接触或呼吸道接触进入人体后,在肝脏内代谢成N-乙酰基对苯二胺及N,N-二乙酰基对苯二胺。已有研究表明体内的N-乙酰基对苯二胺对小鼠雄性生殖有明显的毒性作用,而是否会对雌性妊娠结局造成影响尚未有研究证实。近年来,我国随着二孩政策的实施,生育年龄有显著的延后趋势。对于高龄孕妇,由于遗传因素导致的胚胎遗传物质改变,以及子宫内膜衰老等原因,生育出生缺陷患儿和流产等不良妊娠结局明显高于正常育龄妇女,而是否不同妊娠年龄对环境毒物的敏感性存在差异?亦很少见到文献报道。本研究通过构建小鼠低龄和高龄子宫内膜基质细胞染毒模型,研究N-乙酰基对苯二胺对子宫内膜基质细胞的毒性影响,以及对小鼠基质细胞蜕膜化的作用影响,为动物染毒模型的建立打下基础;通过构建低龄和高龄雌性小鼠染毒模型,研究N-乙酰基对苯二胺对雌性小鼠生殖功能及妊娠结局的影响,以及对相关机制进行初步探讨,为最终探明染发剂对女性生殖及妊娠结局的影响提供一定的研究基础。方法:1构建低龄和高龄雌性小鼠子宫内膜基质细胞染毒模型,不同年龄组又分为染毒组(50μM组,100μM组,150μM组,200μM组)和一个对照组,利用cck8、Western blot、RT-PCR等技术检测小鼠子宫内膜基质细胞活力、氧化应激、凋亡和自噬等相关标志物的表达情况。对不同染毒组进行人工诱导蜕膜化,利用RT-PCR检测蜕膜化标志物的表达。2构建低龄和高龄雌性小鼠亚急性染毒模型,分为染毒组(26.88mg/kg/天组、53.74mg/kg/天组、107.5mg/kg/天组、215mg/kg/天组)和对照组。进行交配实验分别统计小鼠胚胎着床率和产子率,分别收集各组小鼠子宫样本,采用免疫组化、Western blot、RT-PCR等技术检测小鼠子宫内膜自噬等相关分子标志物。结果:1老龄组子宫内膜衰老标志物p16明显高于低龄组。2细胞染毒模型表明,低龄组染毒的200μM剂量组在48h时表现出了细胞活性低于对照组,150μM和200μM剂量组在72h低于对照组,高龄组染毒的200μM剂量组在72h时低于对照组;不同组别活性氧(ROS)的产生有明显的剂量依赖效应,即随着毒物浓度的升高,ROS的产生也逐步升高;染毒组促凋亡因子bax明显高于对照组,且200μM组最高;50μM、100μM和150μM组自噬标志物ATG5明显高于对照组,且100μM组最高,而200μM组与对照组无区别。3基质细胞人工诱导蜕膜化模型表明,高龄组蜕膜化标志物dtprp表达明显低于低龄组;诱导蜕膜化48小时,染毒组明显低于未染毒组。4小鼠染毒动物模型表明,不同年龄组之间,以及不同染毒剂量组之间胚胎着床率和产子率均无差异。结论:1 N-乙酰基对苯二胺在一定较低剂量范围内对小鼠子宫内膜基质细胞活力影响不明显,较高剂量有明显抑制作用,且对高龄组的细胞毒性低于低龄组;基质细胞氧化应激的发生,促进细胞凋亡和自噬发生。说明N-乙酰基对苯二胺可能通过诱发氧化应激介导的细胞凋亡和自噬的发生导致基质细胞功能的损伤。2高龄小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化能力明显低于低龄,但对胚胎植入和妊娠无影响。N-乙酰基对苯二胺对小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化有明显的抑制作用。3在本研究染毒的剂量范围内N-乙酰基对苯二胺对小鼠妊娠没有影响,细胞自噬可能在其中发挥着一定的保护作用。