随着石油等传统石化能源日益枯竭，以及产生的环境污染问题日益严重，迫使人们开始寻找清洁、可持续利用的替代能源，生物柴油作为环境友好的可再生的清洁能源备受关注。生物柴油是指由动植物油与短链醇（甲醇或乙醇）进行酯交换反应所制备的脂肪酸甲酯或脂肪酸乙酯。目前采用的化学合成法具有工艺复杂、能耗高、产品色泽深以及污染环境等缺点，而用脂肪酶法催化合成生物柴油具有条件温和、醇用量小、产品易于收集、无污染物排放等优点，可以解决化学法存在的问题，是生物柴油工业重要发展方向。在本研究中，筛选了10株脂肪酶产生菌并对重点对其中酶活力较高的1株脂肪酶产生菌（Y₁）进行催化生产生物柴油的研究。1.对菌株Y₁进行最佳培养条件确定等研究：菌株Y₁最佳发酵培养基组成为（g/L）：蔗糖5，蛋白胨15，（NH₄）₂SO₄1，K₂HPO₄1.5， MgSO₄·7H₂O2，橄榄油15，以吐温80为诱导剂。在最佳发酵培养基基础上，30℃、170r/min摇床培养36h，最大产酶活力达73.3U/mL，比初始菌株的酶活提高了4.88倍。2.对菌株Y₁的甲醇耐受性进行了驯化，4%的甲醇利于产酶。3.菌株Y₁全细胞的固定化：将菌株Y₁发酵液得到的沉淀进行冷冻干燥，采用聚氨酯泡沫法进行了固定化。4.固定化全细胞法制备生物柴油：转酯化体系：9.65g橄榄油+0.35g甲醇（分三次加入开始加1.0g，24h后加1.5g，48h后加1.0g）+1.5g有机溶剂（正己烷）+1.2g酶。薄层层析分析转酯化产物。本实验对菌种Y₁产酶条件进行了优化和甲醇耐受性的驯化，并进行了全细胞的固定化研究，通过其催化转酯化反应成功合成了脂肪酸甲酯。