当归对宫内缺氧新生大鼠海马神经元与神经胶质细胞的影响及其机制

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haiyunnihao
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目的:探讨言内缺氧对新生大鼠海马CA3区神经元与神经胶质细胞的影响及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在缺氧后的表达与当归的调控作用。方法:选择健康雌性Sprague-Dsawley(SD)大鼠(220-250g)15只分别与一只雄性大鼠合笼配种,于第二日早晨发现阴栓记为雌鼠怀孕0d,记下日期,取出雄鼠,单独饲养雌鼠至孕期14d。将15只孕14d大鼠随机分为对照组(contrast group,CG)、缺氧组(hypoxia group,HG)和当归组(Angelica group,AG),每组各5只。自孕14d开始将缺氧组孕鼠置于三气培养箱中(氧浓度130mL/L,二氧化碳浓度0.3mL/L-0.4mL/L,温度25℃,相对湿度:75%-80%),缺氧2h/d,连续缺氧5d(孕14d-18d)。每天缺氧前1h经尾静脉注射生理盐水(8mL/Kg)。当归组则用250g/L的当归注射液代替生理盐水,余同缺氧组。对照组不缺氧,余同缺氧组。三组孕鼠待其自然分娩(第21d),每只孕鼠可产新生鼠5-8只,每窝随机选取新生鼠4只,取大脑组织(注:从取材后凡接触组织的水溶性试剂中均含0.1%的DEPC)、多聚甲醛固定,石蜡包埋、经海马横切面切片(厚4μm),作NES mRNA、GFAP mRNA、VEGF mRNA原位杂交步骤:①切片常规脱蜡至水。②胃蛋白酶消化,暴露核酸探针结合位点(18℃-23℃,胃蛋白酶浓度1.5mL3%柠檬酸加2滴胃蛋白酶,消化6min)。③1%多聚甲醛后固定。④滴加预杂交液,40℃3h。⑤滴加探针杂交液,加盖专用盖片,40℃过夜。⑥冲洗后滴加生物素化鼠抗地高辛,室温2h。⑦滴加生物素化过氧化物酶,室温30min。⑧滴加SABC-POD,室温30min。⑨DAB避光显色5-10min(镜下控制显色时间),⑩切片常规脱水、透明、封片,400倍拍照、IPP6.0软件分析各指标阳性细胞的积分光密度(integral light density,IOD)值,结果均以X±s表示。用SPSS16.0统计分析软件包进行统计分析(同一指标组间比较用单因素方差分析,两两比较用LSD检验)。结果:缺氧组新生鼠海马CA3区NSE mRNA原位杂交阳性细胞IOD值较对照组减小(P<0.05),当归组较缺氧组增大(P<0.05),均具有统计学意义:缺氧组GFAP mRNA原位杂交阳性细胞IOD值较对照组增大(P<0.05),当归组较缺氧组减小(P<0.05);缺氧组VEGF mRNA原位杂交阳性细胞的IOD值较对照组增大增大(P<0.05),当归组VEGF mRNA阳性细胞的IOD值也较缺氧组增大(P<0.05),均具有统计学意义。结论:①建立了较为科学、合理的胚胎大鼠宫内缺氧动物模型。②一定时间(2h/d,持续5d)、一定浓度(130mL/L)的宫内缺氧可使新生大鼠海马CA3区神经元减少,神经胶质细胞增生。③250g/L的当归注射液可增加缺氧所致的新生大鼠海马CA3区神经元的数量,减弱该区神经胶质细胞的增生,其机制可能是进一步上调缺氧后VEGF mRNA的表达,从而改善缺氧环境所致。
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