苯海索对OGD后体外血脑屏障上P-gp变化的影响

来源 :河南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jinhuikkkl
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探索苯海索(trihexyphenidyl,THP)对氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)后体外血脑屏障(blood brain barrier,BBB)上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)变化的影响及机制研究。方法:(1)原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cells,r BMECs)和星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴别r BMECs;采用MTT法检测不同时间OGD对r BMECs的细胞存活率影响,通过Transwell建立共培养体系模拟体外BBB,每天监测共培养体系跨膜电阻值(transendothelial electrical resistance,TEER),待其达到稳定后进行后续实验;通过测定由内室到外室荧光素钠(fluorescein sodium,Na F)转运的表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)研究不同时间OGD损伤r BMECs后对BBB紧密连接的影响;再分别测定共培养体系罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)转运的Papp值研究不同时间OGD损伤r BMECs后对P-gp功能的影响;采用蛋白印迹法(Western Blot)测定不同时间OGD损伤r BMECs后对P-gp表达的影响;综合以上筛选确定OGD损伤时间;在此损伤时间上,采用免疫荧光染色法检测OGD损伤后对星形胶质细胞的激活。(2)MTT法检测THP对r BMECs的细胞毒性以及THP对OGD损伤r BMECs后细胞存活率的影响,并在显微镜下观察其细胞形态学变化;借助Transwell体系研究THP对OGD损伤r BMECs后体外BBB紧密连接以及P-gp功能的影响;采用Western Blot法测定THP对OGD损伤r BMECs后P-gp表达的影响;并检测THP对OGD损伤后r BMECs内的氧化应激相关指标的变化,如:活性氧族(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH);(3)使用免疫荧光法检测THP对r BMECs损伤后Occludin、NF-κB和P-gp的影响;Western Blot法检测r BMECs损伤后紧密连接相关蛋白MMP-9、i NOS、Occludin和ZO-1以及P-gp相关蛋白Akt、ERK1/2、NF-κB及其磷酸化状态分子的表达水平,同时加入相应的抑制剂进一步研究其相互作用关系。结果:(1)借助Transwell建立原代培养的r BMECs和星形胶质细胞共培养体系,可成功构建体外BBB模型;OGD 4 h可导致r BMECs损伤,BBB结构破坏,P-gp功能亢进,同时激活星形胶质细胞。(2)THP(0.1μM,1μM,10μM)预处理2 h能够改善OGD诱导的r BMECs细胞损伤,修复细胞间的紧密连接;并降低P-gp的表达水平,逆转P-gp功能亢进;THP预处理2 h可降低OGD诱导的r BMECs内ROS含量,并提高SOD、GSH和CAT的酶活性,具有明显的抗氧化作用。(3)THP可降低r BMECs损伤后紧密连接相关蛋白MMP-9和i NOS的蛋白表达,上调Occludin和ZO-1蛋白表达;通过抑制Akt、ERK1/2、NF-κB及其磷酸化状态分子的表达,降低r BMECs内P-gp的表达水平。结论:THP通过降低OGD损伤后r BMECs内ROS含量,提高抗氧化物酶活性发挥抗氧化作用,进而调节体外血脑屏障上P-gp变化,其机制可能与PI3K/Akt及ERK1/2信号通路有关。
其他文献
背景:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发病率和死亡率的持续升高已经严重威胁到人类的健康和生命,但促使CRC进展的具体分子机制仍尚未明了。多项研究证实CRC的发生发展及转
微藻光合固碳效率高,生长速率快,可以利用CO2生产多种高附加值产物。质体醌(PQ)和泛醌(UQ)不仅是细胞内电子传递链上重要的电子载体,还参与多种物质的合成,其氧化还原状态和含量的变化对生理代谢有重要的影响。目前关于微藻胞内PQ、UQ的合成及其相关代谢调控机制的研究相对较少,因此亟待探索PQ、UQ含量变化对微藻生长及生理代谢的影响。本文以集胞藻和莱茵衣藻为研究对象,在细胞内表达新疆紫草中的对羟基苯
学位
目的:脑卒中发病后的主要功能障碍之一是下肢运动功能障碍。其中,主要表现为肌力下降等症状。它主要是由于长时间不使用肌肉使得肌肉的适应性发生了改变,以及一些神经因素等
随着社会的发展与进步,物流调度、路径导航和无人驾驶等技术在日常生产生活中起着越来越重要的作用,吸引了众多数学和经济学家的关注。本文研究了多车辆情况下的塔式起重机问题(Stacker Crane Problem),提出了相应的近似算法。问题的输入由一个包含顶点集V,边集E和弧集A的混合图G=(V,E,A)和一个定义在E∪A上的非负整数费用函数c组成。根据不同的优化目标,本文考虑以下四个问题:(一)k
学位
现如今,化石能源日渐枯竭,化石能源使用带来的环境污染问题也日益严峻。氢能源被视为石油等化石能源的良好替代品而被广泛研究。氢能源的使用绕不开能量的转化利用问题,而质
在光学系统中,反射式系统相对于折射式系统,它具有更紧凑的光路,更大的视场,更宽的谱段以及更易于轻量化设计等一系列优点,因而逐渐发展起来。又因为离轴反射式光学系统相对
隐球菌性脑膜炎是隐球菌经血液运输后透过血脑屏障特异性引起中枢神经系统感染的疾病,通常在免疫功能缺陷患者中(艾滋病感染、器官移植、放疗化疗、外科手术等)造成致命威胁。在全世界范围内,隐球菌性脑膜炎的发病率和死亡率逐年增加,面临床上用于治疗深部隐球菌感染的药物十分有限,并且尚无治疗隐球菌脑膜炎的特效药。因此,迫切需要研发具有新型作用模式的、全新结构的抗真菌药物。一、咔啉类抗真菌化合物的结构优化以及生物
学位
目的探讨肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)病情及预后的评估价值。方法收集2018年3月1日至2019
目的:以累积分娩率为主要研究目标,以到达活产时间、周期取消率、中重度卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)发生率、早产发生率、低体重儿发生率等
学位