磷酸钙骨水泥复合抗结核药物缓释载体的研究

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目的制备一种新型抗结核多孔磷酸钙骨水泥缓释载体,并研究载体的体内外特性。方法复乳溶剂挥发法制备利福平-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球(利福平-PLGA微球,RFP-PLGA Ms),并研究微球的特性,测定载药量、包封率并行体外药物缓释实验。将微球以10%、20%、30%(W/W)的比例分别与磷酸钙骨水泥(CPC)复合,制备载有利福平-PLGA微球的多孔磷酸钙骨水泥,测定材料的总孔隙率、大孔率及抗压强度,通过优化筛选出合适的复合比例。将材料的浸提液与Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)共同培养,以MTT法测定在不同材料浸提液中rBMSCs的增殖率,成骨能力以碱性磷酸酶试剂盒检测ALP水平,测定材料的细胞毒性。将利福平-PLGA微球/CPC试件(实验组)及利福平/CPC试件(对照组)分别制成相同直径的圆柱状试件,分别植入健康新西兰大白兔的双侧股骨髁中,于术后2周、4周、8周、12周取植入区旁的髁旁肌,高效液相色谱法测定局部组织药物浓度,以此来判断局部抗结核治疗是否有效。术后12周取各组骨标本行组织病理切片观察,评价材料降解情况及骨组织生长情况。结果10%、20%、30%利福平-PLGA微球/磷酸钙骨水泥载体试件的总孔隙率、大孔率和抗压强度分别为(54.76±1.31)%、(13.67±1.62)%、(11.89±0.96)Mpa;(63.76±1.35)%、(23.87±1.67)%、(4.8±0.68)Mpa;(72.97±1.10)%、(37.87±2.08)%、(1.03±0.65)Mpa。rBMSCs在利福平-PLGA微球/磷酸钙骨水泥复合材料上生长较好,细胞增殖及碱性磷酸酶水平与空白对照组有明显差异(P<0.05)。在利福平缓释效果方面,利福平-PLGA微球/CPC优于利福平-CPC组(P<0.05),且前者的药物浓度能在较长时间内保持高于利福平的最低抑菌浓度(MIC)10倍以上。利福平-PLGA微球/CPC试件植入兔股骨髁内12W时,材料降解明显快于利福平/CPC试件组,实验组材料植入区的骨长入率为(34.56±1.47)%,明显高于对照组的(1.56±0.84)%(P<0.05)。结论利福平-PLGA微球可显著提高磷酸钙骨水泥的孔隙率促进其降解,微球降解形成互相连通的大孔隙(>50μm)显著提高了骨细胞的长入率,从而加速磷酸钙骨水泥降解;同时利福平药物能较长时间缓释,在结核病灶局部能长时间维持有效的抗结核药物浓度,有望达到有效降低骨结核术后复发率的目的,可用于结核性骨缺损的修复与骨重建。
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