【摘 要】
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本研究探讨了绵羊不同直径腔卵泡卵丘细胞及卵母细胞的能量代谢差异,以及双调蛋白(Amphiregulin,AREG)和卵母细胞分泌因子(Oocyte-Secreted Factors,OSFs)对其影响。研究结果
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本研究探讨了绵羊不同直径腔卵泡卵丘细胞及卵母细胞的能量代谢差异,以及双调蛋白(Amphiregulin,AREG)和卵母细胞分泌因子(Oocyte-Secreted Factors,OSFs)对其影响。研究结果如下:1.在体外培养过程中,来源于小腔卵泡的卵丘细胞的G6PDH、PFKL和PFKM的mRNA表达量以及细胞增殖能力显著低于中腔卵泡卵丘细胞(P<0.05)。与不添加AREG组相比,50ng/ml和100ng/mlAREG显著提高了小腔卵泡卵丘细胞的增殖能力(P<0.05),10ng/mlAREG显著提高了中腔卵泡卵丘细胞的增殖能力(P<0.05),但对小腔卵泡卵丘细胞的无显著影响(P>0.05);而在GDF9和BMP15的协同作用下,10ng/ml AREG可以显著提高不同直径腔卵泡卵丘细胞的增殖能力和ATP含量(P<0.05),同时明显促进了卵丘细胞培养液中的葡萄糖消耗、乳酸生成和NADPH生成(P<0.05)。2.卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-Oocyte Complexes,COCs)的体外培养结果表明:成熟前,小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD++水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P<0.05);体外成熟培养后,小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P<0.05)。与对照组相比,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位(P<0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P>0.05);另外,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD(P)H和FAD++水平、NADPH生成及ATP含量(P<0.05)且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P>0.05),同时显著提高培养液中的葡萄糖消耗、乳酸生成及卵丘细胞的ATP含量(P<0.05)且显著高于中腔卵泡组(P<0.05)。与对照组相比,在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率(分别为(43.79土3.69)%、(28.54±4.31)%和(78.99±1.12)%、(47.46±2.50)%,P<0.05),而且与中腔卵泡卵母细胞组无明显差异(P>0.05)。综上表明,绵羊小腔卵泡中卵丘细胞及卵母细胞的能量代谢水平较低,小腔卵泡卵母细胞的IVM质量较差;在GDF9和BMP15的协同作用下,AREG可以增强小腔卵泡卵丘细胞及卵母细胞的能量代谢,并可提高卵母细胞IVM质量及体外受精后的胚胎发育能力。研究结果为进一步阐明卵母细胞成熟机制以及改善卵母细胞的IVM体系提供理论依据。
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