白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质,其良好的生物相容性、生物降解性、无免疫原性等性质使其可作为纳米制剂的优良载体。除了传统的基于粒子尺寸和肿瘤血管内皮缺陷的EPR效应被动靶向以外,白蛋白纳米粒对于肿瘤部位还具有主动靶向作用。白蛋白可以与肿瘤血管高表达的gp60结合通过细胞内凹作用穿透到肿瘤细胞间质,再与肿瘤细胞高表达的SPARC结合转运至胞内。目前,国外已经有紫杉醇白蛋白纳米粒(Abraxane(?))通过nab TM技术平台被成功研制并上市。基于同技术平台研制的多西他赛白蛋白纳米粒、雷帕霉素白蛋白纳米粒等,都已经相继进入临床试验阶段。基于白蛋白纳米粒的给药优势以及紫杉醇和多西他赛的抗肿瘤疗效,本实验室采用“解折叠/重折叠”专利技术制备多西他赛白蛋白纳米粒、紫杉醇白蛋白纳米粒并对其进行质量研究。其中,纳米粒包封率以及体外释放度是评价纳米制剂质量的重要指标,但是目前并没有关于纳米制剂包封率以及体外释放度评价方法的药典标准存在,这严重制约了纳米制剂安全性的提高及其产品研发的进展。本文主要就包封率以及体外释放度这两个方面进行方法研究。本文第一部分建立了紫杉醇白蛋白纳米粒包封率检测方法并进行了方法学验证。实验采用柱层析法分离紫杉醇白蛋白纳米粒的包封药物与游离药物,用高效液相色谱仪(HPLC)检测紫杉醇浓度。方法中使用葡聚糖凝胶G50为填料,洗脱液分别为水、异丙醇:水:乙酸=100:100:1、异丙醇:乙酸=200:1。先用30ml纯水洗脱包封药物,后用酸化有机相将凝胶柱中游离紫杉醇洗脱,此法检测到紫杉醇白蛋白纳米粒平均包封率为99.8%,方法学验证中,紫杉醇定量限为0.2070μg/ml,在0.2070～31.0486μg/ml范围内线性良好,游离药物加样回收率在90%～110%内,且此方法在层析柱长、洗脱液体积、上样量、检测波长等条件的微小变化时具有耐用性,表明此法灵敏、准确、可行。本文第二部分建立了紫杉醇白蛋白纳米粒体外释放度检测方法并进行了方法学验证。实验采用透析法检测紫杉醇白蛋白纳米粒体外释放度,选用智能溶出仪小杯篮法、50rpm/min、100KD透析袋、5%人血白蛋白作为释放介质、上样浓度为200μg/ml、释放介质体积为100ml,在0.5h、2h、4h、6h、8h、12h取样后用HPLC检测紫杉醇浓度。我们对此方法从专属性、系统适用性、线性、精密度、溶液稳定性、耐用性等方面进行了方法学验证,本方法中释放介质、稀释剂等对紫杉醇的测定无干扰,紫杉醇在0.05881～1.76441μg/ml范围内线性良好,释放介质体积、浓度的微小变化对体外释放度的检测无影响,表明该法专属性好、灵敏准确,可用于紫杉醇白蛋白纳米粒的检测。本文第三部分对多西他赛白蛋白纳米粒的包封率测定进行了研究,先后采用凝胶柱层析法、微柱离心法、超滤离心法分离纳米粒与游离多西他赛。凝胶柱层析法中筛选了葡聚糖凝胶G50、G25、G15、LH20、琼葡糖G50HP、琼葡糖G75HP等填料,筛选了洗脱剂的pH,筛选了游离药物的浓度以及上样浓度等,都未能将纳米粒与游离药物良好分离。微柱离心法中,筛选了微柱柱长、样品上样量以及离心转速等因素,所检测的药物包封率略低,且此法检出的包封药物中有一定比例的游离药物存在。在后续超滤法实验中,超滤膜材对饱和多西他赛水溶液中多西他赛会产生较强吸附,纳米粒样品在离心过程中也会对膜材造成堵塞影响溶液离心。为解决这两个问题,实验先用乙醇溶解游离多西他赛然后用β-环糊精水溶液稀释的方式增溶,以及先将纳米粒离心沉淀然后取上清液超滤检测包封率,并进行了加样回收率测定。用此法检测出来的多西他赛白蛋白纳米粒包封率为90.73%,游离药物回收率为85.89%,加样回收率为90.23%。综上所述,本文建立了紫杉醇白蛋白纳米粒包封率和体外释放度的检测方法并进行了方法学验证,还开发了多西他赛白蛋白纳米粒的包封率检测方法,为纳米粒的质量研究提供方法支持,对制剂的工艺优化及质量控制等具有重要意义。