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目的探讨丝素-壳聚糖共混膜(Silk fibroin-chitosan blend SFCS)与颌下腺细胞体外复合培养的可行性,为进一步构建功能性的颌下腺组织提供依据。方法体外组织块法原代培养3天龄SD大鼠的颌下腺细胞(RSMG-cell),免疫组织化学方法进行细胞来源鉴定,传代。将浓度为2.0×104／ml的第2代颌下腺细胞悬液接种于5mm×5mm×2mm丝素-壳聚糖共混膜体外复合培养,作为实验组。同时将2.0×104／ml的第2代颌下腺细胞悬液接种于培养板体外培养,作为对照组。分别于接种后1h、2h、4h、8h、24h,测定实验组和对照组SD大鼠颌下腺细胞的附着率。倒置相差显微镜定期观察2组SD大鼠颌下腺细胞的生长情况和形态变化,并于复合培养的第3、7天取材,扫描电镜观察颌下腺细胞的超微结构。MTT法分别检测2组SD大鼠颌下腺细胞的增殖情况。分别取复合培养1天到10天的培养上清液,测定淀粉酶含量,检测2组SD大鼠颌下腺细胞的分泌功能。Hoechst-PI染色,检测细胞活力。采用SPSS for windows 13.0统计分析软件对结果进行两个独立样本t检验,检验水准a=0.05,P<0.05认为有统计学差异。结果成功的将SD大鼠颌下腺细胞(RSMG-cell)与制备出的丝素-壳聚糖共混膜体外复合培养。并观察到实验组于接种1h时RSMG-cell即开始附着于丝素-壳聚糖共混膜上,4 h时达到60%以上,8 h时80%以上RSMG-cell附着,24 h时93%左右的RSMG-cell附着。而对照组RSMG-cell 2h时开始附着于培养板上,4h时达到45%。8h时80%以上颌下腺细胞附着,24h时达95%以上的颌下腺细胞附着。倒置相差显微镜观察2组RSMG-cell均生长良好,细胞形态无明显差异,实验组第3天时即见RSMG-cell伸展,细胞数量略有增加,突起开始明显。第7天时细胞数量明显增加,伸展充分,突起明显,胞质内可见明显的分泌颗粒。颌下腺的3种细胞即导管上皮细胞,肌上皮细胞和腺泡上皮细胞在整个生长期间呈多样性。扫描电镜下可见复合培养7天的RSMG-cell伸展在丝素-壳聚糖共混膜的网状结构内,呈多角形、梭形、带有多个突起,细胞表面有许多的分泌颗粒,丝状纤维及细胞外基质。随着复合培养时间的延长,细胞上清液中淀粉酶含量均有不同程度的增加。Hoechst-PI染色,见RSMG-cell与丝素-壳聚糖共混膜复合培养的第3天RSMG-cell的细胞核呈弥散均匀的蓝色荧光。第5天时细胞的荧光量有明显增加,第7天时细胞的荧光量显著增加,细胞密集成片荧光。第9天时开始有细胞凋亡,呈红色荧光,但仍然可见分裂期的细胞。结论SD大鼠颌下腺细胞(RSMG-cell)与丝素-壳聚糖共混膜有良好的生物相容性,RSMG-cell在丝素-壳聚糖共混膜上生长、增殖良好。