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产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是世界范围内食源性疾病的重要原因之一,可导致人感染性腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC)以及高病死率的溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome,HUS)。STEC宿主广泛,反刍动物(牛)是其最主要宿主。目前已报道的STEC血清型达400多种,其中0157:H7血清型因与严重疾病的暴发流行而引起广泛关注,然而近年来由非0157 STEC引起的散发感染和暴发逐渐增多。本研究对中国不同来源非0157 STEC分离株O:H血清型,stx1、stx2及eae等主要毒力基因的情况进行了分析。476株分离株中,除68株为O不可分型和16株为H不可分型外,共检测出174种O:H血清型,其中,02:H45、08:H16和02:H32为优势血清型。stx1、stx2及stx1+stx2三种志贺毒素基因型的检出率分别为25.84%、64.71%和9.45%,毒力基因eae的阳性率为6.93%。33株分离株同时携带stx和eae基因,主要为026、0103、O111血清群的菌株。目前0157 STEC的分离培养方法已经成熟,如使用含有亚碲酸钾和头孢克肟的山梨醇麦康凯培养基(CT-SMAC),主要是基于0157 STEC菌株不发酵山梨醇的重要特性,以及具有较其他肠杆菌科细菌较高的亚碲酸钾抗性水平。但是,由于非0157 STEC的表型和基因型的多样性,菌株的选择性分离仍存在很大挑战。本研究检测了 476株非0157 STEC分离株亚碲酸钾抗性水平,并对其在12种不同选择性培养基上的生长情况进行了评价。结果显示476株非0157 STEC菌株中仅108株菌的亚碲酸钾最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)高于4 μg/ml,96株携带完整的亚碲酸钾抗性基因簇(ter),ter基因与亚碲酸钾抗性水平相关。476株非0157 STEC菌株均能在麦康凯(MAC)、山梨醇麦康凯(SMAC)、胰蛋白胨胆汁X-葡糖苷酸(TBX)、Rainbow(?)Agar 0157、CHROMagarrMECC 和 Fluorocult(?)O157:H7 六种培养基上生长。CT-SMAC、CHROMagarTM 0157 和 CHROMagarTM STEC 培养基则分别抑制了 12.2%、31.1%和38.0%菌株的生长。此外,4.6%、33.2%和45.0%的菌株在RBA-USDA和RBA-NT两种改良Rainbow(?)Agar O157培养基以及BCM 0157:H7 培养基上被抑制。本研究显示了非0157 STEC菌株在不同培养基上的菌落特征呈现多样性,并且大多数菌株对亚碲酸钾敏感;提示不含添加剂或含低浓度添加剂的低选择性培养基结合高选择性培养基联合使用可以有效地提高不同血清型的非0157 STEC的分离效率。通过上述对不同选择性培养基的评价,我们选择四种(MAC、CHROMagarTM ECC、RBA-NT和CHROMagarTM STEC)培养基组合对四川某农场采集的肉牛粪便标本进行了 STEC分离,并分析了牛源分离株的特征。120份肉牛粪便样本中,通过实时荧光定量PCR方法对样本进行初筛,样本stx阳性率为90.00%。使用四种培养基共从87份stx1/stx2阳性样本中分离到126株STEC,样品分离率为 72.5%。使用 CHROMagarTM ECC、MAC、RBA-NT 和 CHROMagarTM STEC选择性培养基分别从29、29、71和57份样本中分离出32、31、91和73株STEC菌株。126株分离株共包括17种O:H血清型,084:H2、O81:H31、ONT:H8、O5(O70):H31为主要血清型;stx1阳性率为24.60%,均为stx1a,stx2阳性率为35.71%,亚型包括stx2a、stx2d和stx2c,分别占stx2阳性菌株的53.33%、24.44%和22.22%,其余50株同时携带stx1a+stx2d、sx1a+stx2d或stx1a+stx2c基因;iha、saa、eae、paa和subA基因的阳性率分别为 99.21%、58.73%、29.37%、23.81%和 18.25%;PFGE将126株分离株分成49种不同的PFGE带型。本研究揭示了牛具有很高的STEC携带率,且菌株具有高度多样性。通过对中国非0157 STEC分离株亚碲酸钾抗性水平检测、对不同STEC选择性培养基的评价,以及根据牛粪便样品的分离效果,建议选择不含亚碲酸钾的大肠埃希菌培养基(MAC)与含有一定浓度亚碲酸钾的选择性培养基RBA-NT结合使用,可以提高从复杂菌群环境中非0157 STEC的分离率。该方法可为开展有针对性的非0157 STEC检测和监测提供重要参考,以及对提高识别STEC暴发风险的能力具有重要意义。