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目的;研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxicischemicbraindamage,HIBD)的保护作用,以及反映新生鼠HIBD后神经细胞再生、突触重建、神经干细胞激活各项指标的动态变化,以期从神经细胞形态和行为学两方面证实新生鼠HIBD经bFGF早期治疗后神经系统功能得到改善,为临床新生儿缺氧缺血性脑病的早期防治提供理论依据。
方法;通过结扎并剪断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉,吸入8%O2+92%N22小时制备新生鼠HIBD模型,设置假手术组、生理盐水对照组、bFGF治疗组。通过免疫组化方法和计算机图像分析技术检测三组大鼠不同时点(术后第4d、7d、10d、17d、24d)海马CA1区巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)、生长相关蛋白(growth-associatedprotein,GAP-43)的表达变化及光镜下脑组织病理改变;通过Morris水迷宫(Morriswatermaze)动态观察三组大鼠学习记忆功能。
结果;1.脑组织病理改变:假手术组大鼠无异常病理改变;对照组大鼠神经细胞变性、坏死,胶质细胞增生,海马锥体细胞层次紊乱、排列松散,术后第4~7d最重,术后第10d病理改变逐渐好转;治疗组大鼠神经细胞变性、坏死较对照组减轻。2.Nestin表达:各时点对照组Nestin阳性细胞数较假手术组明显增加,治疗组Nestin阳性细胞数增加较对照组更明显,三组比较差异有显著性(P<0.01);3.GFAP表达:假手术组海马内GFAP阳性细胞数量和染色强度术后第7d达高峰;对照组GFAP表达较假手术组明显增多,术后第10d达高峰,GFAP阳性细胞主要分布于海马CA1、CA3区;治疗组GFAP表达较假手术组和对照组明显增多,术后第10d达高峰,第4d、10d、17d三组比较差异有显著性(P<0.05);4.GAP-43表达:三组新生鼠海马CA1区GAP-43表达均于术后第10d达高峰,对照组和治疗组GAP-43表达较假手术组明显升高,其中治疗组升高更明显,三组各时点比较差异均有显著性(P<0.05)。5.Morris水迷宫观察:对照组逃避潜伏期(51.75±11.27秒)较治疗组(40.32±11.48秒)和假手术组(36.58±10.83秒)明显延长(P<0.05);对照组拆除平台后跨越平台的次数(2.34±2.42次)较治疗组(5.08±3.86次)和假手术组(7.03±3.62次)明显减少(P<0.05)。
结论;1.bFGF可减轻新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞的急性水肿、坏死;2.新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑缺血易损伤区Nestin、GAP-43、GFAP的表达增加,可能与脑损伤后神经再生和轴突重塑有关;3.给予外源性bFGF治疗可增强新生鼠脑缺氧缺血后中枢神经系统Nestin、GAP-43、GFAP的表达,并可明显改善新生鼠缺氧缺血性脑损伤后的学习记忆能力;4.外源性给予bFGF对新生鼠因脑缺氧缺血所致神经细胞损伤的修复发挥一定的保护作用,新生鼠缺氧缺血性脑损伤经bFGF早期治疗后神经系统功能可得到改善;从神经再生角度为临床应用bFGF治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供了实验依据。