生物柴油是以动植物油脂为原料制得的液体燃料，是普通柴油的替代品，具有环境友好可再生等优点。研究了固定化脂肪酶Lipozyme TL IM和Novozym 435催化毛棉籽油制备生物柴油的过程，结果发现：向反应体系中添加甲醇，可减少乙酸的生成，明显提高生物柴油得率，且能增加酶的稳定性。以响应面法(RSM)优化反应条件，并研究了脂肪酶催化毛棉籽油合成生物柴油的动力学机制。　　 在制备生物柴油前，对毛棉籽油预处理，降低磷脂和过氧化物的含量。以水化法除磷脂，水化时间15 min，水化温度60°C，加油重3[％]的水，水洗3次后磷脂含量由0.2994[％]降低到0.0769[％]。以吸附法去除油中的过氧化物，在0.095MPa的真空度下，吸附温度98°C，吸附时间12min、加油重3[％]的活性白土，棉籽油的过氧化值由0.1944降低到0.1148。　　 确定制备生物柴油最佳单因素反应条件为：正己烷作溶剂，乙酸甲酯与油摩尔比9:1，添加油重3[％]的甲醇，油重10[％]的Lipozyme TL IM和5[％]的Novozym 435复合使用，温度55°C，转速150 r/min反应8 h，生物柴油得率达到91.83[％]。　　 通过Plackett-Burman实验从反应变量：甲醇浓度、反应温度、反应时间、复合酶浓度、底物(乙酸甲酯和棉籽油)摩尔比和有机溶剂正己烷的浓度中，筛选出对生物柴油得率影响显著的因素。再以响应曲面法优化对生物柴油得率影响显著的因素(甲醇浓度、反应温度和复合酶浓度)，优化后的反应条件：复合酶量为油重的17.7[％]、反应温度57.36°C、底物摩尔比(乙酸甲酯/棉籽油)为12:1、油重2.96[％]的甲醇和35[％]的正己烷、反应10h，模拟的生物柴油得率为93.61[％]。经过验证实验得到94.92[％]的生物柴油得率，与预测值相符。　　 脂肪酶催化棉籽油制备生物柴油的动力学符合双底物抑制的乒乓BiBi机制，得到相关的动力学参数分别为：Vmax=0.3473mol/(min·L·g)；KA=0.0939mol/L；KB=0.066mol/L；KiA=0.0006mol/L；KiB=0.0937mol/L。