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目的通过体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞,建立二氧化硅(SiO2)刺激后的泡沫细胞模型,探讨过氧化物酶增殖体激活性受体(PPARγ)-CD36通路在矽肺肺泡巨噬细胞脂质代谢调控中的作用机制,为延缓矽肺的发病进程、治疗矽肺提供新的思路。方法常规体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞,经细胞增殖毒性检测试剂盒(MTS)确定SiO2和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激浓度;将细胞随机分为对照组(常规培养的细胞)、SiO2组(50μg/ml SiO2刺激)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组(50μg/ml ox-LDL刺激)以及模型组(50μg/ml SiO2和ox-LDL刺激),分别培养36h。采用MTS法检测ox-LDL对细胞存活率的影响;油红O染色观察细胞内脂质蓄积;总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)试剂盒检测细胞中TC和FC的表达情况,并计算胆固醇酯(CE)含量;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测PPARγ和CD36基因和蛋白的表达情况;激光共聚焦显微镜观察PPARγ和CD36荧光强度;大鼠细胞生长转化因子(TGF-β)酶联免疫试剂盒(ELISA)检测细胞上清液TGF-β的表达量。巨噬泡沫细胞模型建立好后,给予磺基-N-琥珀酰亚胺基油酸酯(SSO)抑制剂阻断CD36通路,细胞随机分为以下四组:SSO抑制剂组(5μM SSO)、溶剂对照组(等体积DMSO)、SSO实验组(SSO+SiO2+ox-LDL)以及模型组(DMSO+SiO2+ox-LDL),分别培养36h。采用以上实验方法观察细胞CD36和PPARγ表达以及泡沫化情况。随后加入PPARγ特异性抑制剂GW9662阻断PPARγ信号通路;主要分为GW9662抑制剂组(5μM GW9662)、溶剂对照组(等体积DMSO)、GW9662实验组(GW9662+SiO2+ox-LDL)以及模型组(DMSO+SiO2+ox-LDL),孵育36h;同样采用以上实验方法进行观察检测。结果1 MTS确定SiO2和ox-LDL刺激浓度:SiO2刺激细胞36h后,发现浓度在50μg/ml后,细胞存活率开始显著降低(P<0.05),经预实验确定SiO2刺激浓度为50μg/ml;细胞加入不同ox-LDL刺激,发现与对照比较,细胞存活率在50μg/ml时达到最大,且差异具有统计学意义(P<0.05),确定ox-LDL浓度为50μg/ml。2油红O染色发现,与对照组比较,SiO2组、ox-LDL组和模型组中细胞胞浆内出现大量的红色脂滴,以及吞噬的SiO2颗粒,其中以模型组较为明显。3模型组TC和FC均较对照组、SiO2组和ox-LDL组显著升高(P<0.05),且CE/TC比值大于50%(P<0.05)。4对照组、SiO2组和ox-LDL组细胞内PPARγ和CD36的蛋白和基因表达均显著低于模型组(P<0.05)。5激光共聚焦显微镜下观察,与模型组比较,对照组、SiO2组和ox-LDL组细胞内PPARγ和CD36表达的荧光强度均较弱。6 ELISA法检测得出,模型组细胞释放TGF-β的量均高于对照组、SiO2组和ox-LDL组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。7 SSO抑制剂阻断CD36通路后,实验结果显示:与模型组比较,泡沫细胞模型加入SSO抑制剂后,细胞内CD36 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞内PPARγ mRNA表达同样呈现降低趋势(P<0.05),但蛋白表达无统计学意义(P>0.05);激光共聚焦显微镜下观察发现,与模型组比较,SSO实验组CD36荧光强度明显减弱,PPARγ表达无明显差异;SSO实验组细胞内TC和CE含量显著低于模型组(P<0.05),与SSO抑制剂组和溶剂对照组之间差异没有统计学意义(P>0.05),且CE/TC均小于50%;此外SSO实验组较模型组泡沫阳性细胞数目明显减少,细胞上清液中TGF-β表达显著降低(P<0.05)。8抑制剂GW9662阻断PPARγ通路发现:与模型组相比,GW9662实验组细胞内CD36 mRNA和蛋白表达随着PPARγ表达的降低显著减小(P<0.05)。进一步通过激光共聚焦显微镜证实,GW9662实验组细胞内PPARγ红色荧光弱于模型组,CD36荧光强度也相应减弱。与模型组比较,GW9662实验组、抑制剂组和溶剂对照组细胞内TC含量明显降低(P<0.05),且这三组的CE/TC值均小于50%(P<0.05);同时GW9662实验组阳性泡沫细胞数目明显减少;细胞上清液中TGF-β表达显著降低(P<0.05)。结论1 SiO2可以促使巨噬细胞脂质代谢紊乱,加剧细胞泡沫化,同时释放细胞因子TGF-β。2 PPARγ可能参与介导游离SiO2所诱导的CD36表达。3游离SiO2通过PPARγ-CD36通路加剧ox-LDL诱导的细胞脂质代谢紊乱,产生泡沫细胞,参与肺纤维化过程。