目的:1.阐明白背叶叶子的化学组成成分,探究发挥药效的可能成分;2.通过核磁共振技术对收集的大鼠尿液标本进行代谢组学分析,在代谢水平探究TFM抗肝纤维化的作用机制。同时,筛选出的潜在生物标记物进行独创性途径分析（IPA）,找到白背叶叶总黄酮抗肝纤维化的潜在靶基因;3.探讨TFM抗肝纤维化的药理作用及其分子生物学机制。方法:1.白背叶叶全成分分析及总黄酮的分离将白背叶叶子粉碎,50%乙醇回流提取即得白背叶叶子提取物。样品过滤后,采用超高效液相色谱-三重四级杆飞行时间质谱联用技术（UHPLC Triple TOF MS/MS）,结合标准品数据库分析白背叶叶子化学成分。将白背叶叶子提取物过聚酰胺柱,以30%乙醇洗脱;洗脱液浓缩干燥后过聚酰胺柱,以40%乙醇洗脱,洗脱液干燥后可得白背叶叶总黄酮（TFM）。取适量白背叶总黄酮,溶解过滤后行UHPLC Triple TOF MS/MS分析;2.大鼠尿液代谢组学研究及IPA分析将24只雄性SD大鼠随机分为三组（正常组、模型组、TFM组）,除正常组外,所有大鼠均灌胃给予2 ml/kg CCl4（橄榄油1:1混合）,每周2次,共16周。造模第8周,三组中各随机选取2只大鼠进行HE病理检查。确认造模成功后,于第9周起,TFM组大鼠灌胃100mg/kg的TFM,正常组与模型组灌胃等量的溶剂,每天一次,连续8周。末次给药24小时后,禁食不禁水,夜间于代谢笼中采集三组大鼠尿液,次日取材。大鼠麻醉处理后腹主动脉采血处死,室温下离心收集血清,用以检查丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及碱性磷酸酶（ALP）水平。部分肝脏置于福尔马林溶液,用以后续病理切检查。血生化水平由全自动生化分析仪检测。HE染色观察肝组织病理改变。采用核磁共振技术研究CCl4诱导肝纤维化大鼠尿液代谢物在TMF处理前后的动态变化。利用IPA分析寻找TFM改善肝纤维化的潜在靶基因,并通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）验证靶基因表达情况;3.TFM抗肝纤维化的药理作用及其分子生物学机制研究采用CCl4诱导大鼠复制肝纤维化模型。对CCl4诱导的肝纤维化大鼠灌胃给予秋水仙碱（每天0.2 mg/kg）、TFM（每天25、50、100 mg/kg）,正常大鼠给予了相同剂量的溶剂;用HE染色进行肝脏组织病理学评估,并通过自动生化分析检测血清生化参数水平;同时,通过Masson三色染色法观察大鼠肝脏中的胶原蛋白沉积;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒测量胶原参数和炎症因子;另外,使用相应的测定试剂盒来评估TFM抗氧化酶和脂质过氧化作用;通过RT-PCR实验和Western blot实验分析肝纤维化相关基因和蛋白质的表达。结果:1.经查阅文献并与商业数据库对比,共鉴定化合物63个,其中面积占比最高的为黄酮类,共18种。经聚酰胺柱洗脱后,得到白背叶叶总黄酮;2.TFM可显著降低血清ALT、AST、ALP水平,改善肝脏脂肪变性并减轻炎症反应;尿液代谢组学方面,共发现7个潜在的生物标记物,主要涉及2个代谢途径;IPA分析显示肿瘤坏死因子（TNF）可能是TFM改善CCl4诱导大鼠肝纤维化的潜在靶点。经TMF治疗后,TFM组大鼠肝脏中TNF-α蛋白及m RNA表达显著低于模型组;3.TFM对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有剂量依赖性的抑制作用。结果显示,在CCl4诱导的肝纤维化中,相比于模型组,TFM组大鼠血清中的AST、ALT、ALP、白蛋白（ALB）和总蛋白（TP）水平明显降低;超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平得到逆转;此外,TFM显著减轻了胶原蛋白的积累,并降低了羟脯氨酸（Hyp）,III型前胶原（PC-III）,I型胶原蛋白（Col I）,透明质酸（HA）和层粘连蛋白（LN）的含量;RT-PCR和Western blot结果表明,TFM明显抑制CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝纤维化的标志性因子α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,改善了TIMP-1/MMPs平衡;此外,TFM还通过抑制核因子-κB（NF-κB）的激活而减弱了促炎细胞因子,包括白介素-1β（IL-1β）,白介素-6（IL-6）和TNF-α;同时,TFM处理可抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路。结论:1.白背叶叶子含有丰富的黄酮成分,可能为白背叶叶发挥药效的物质基础之一;2.TFM主要是通过纠正三羧酸循环及氨基酸代谢紊乱的途径改善CCl4诱导大鼠肝纤维化。同时,本研究发现TNF可能是TMF治疗肝纤维化的潜在靶基因;3.TFM可以减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能是由于减少ECM积累并调TIMP-1/MMPs平衡节,提高机体抗氧化能力和调节TGF-β1/Smad信号通路以及NF-κB依赖性炎症反应的能力。