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佐剂是指先于抗原或与抗原混合同时注入动物体内,能够改变或增强机体对该抗原的免疫应答,发挥辅助作用的一类物质。疫苗中加入佐剂可以为机体提供更加长久的免疫保护。自1926年Glenny等发现铝盐复合物吸附沉淀的白喉毒素(DT)悬液要比类毒素本身具有更好的免疫原性起,铝盐复合物作为疫苗佐剂已有80多年的历史了。铝佐剂作为第一个被美国食品药品监督局FDA批准的人用佐剂,仍然是世界上公认最安全,应用最广泛的佐剂。 本研究尝试配制不同类型的磷酸盐缓冲液和铝盐溶液,设定不同的温度,利用蠕动泵将两类溶液在不同的混合器中混合,使用氢氧化钠调节pH,配制出若干批次具有不同理化性质的铝佐剂;测定它们的pH,粒径大小和PZC等各项理化参数,筛选出四种颗粒较小的铝佐剂,编号25~28,研究表明其颗粒大小可在10~20μm左右,PZC介于氢氧化铝和磷酸铝佐剂之间;考察了高温高压灭菌对其理化性质的影响,结果表明除25号佐剂外,其他三种佐剂的pH和粒径等性质在灭菌后没有发生明显变化。 本研究将四种铝佐剂分别与本实验室纯化的HPV16L1、18L1和HEV239病毒样颗粒混合后配制出HPV16、18和HEV疫苗。抗原吸附率测定实验结果表明各种铝佐剂对不同病毒样颗粒的吸附率为60%-80%左右,部分组合可达90%;解离实验表明病毒样颗粒在解离液作用下的大部分解吸附比率大约为70%上下。考察不同温度下三类疫苗蛋白的活性,发现26和27号佐剂配制的疫苗蛋白活性优于25和28号佐剂。DSC差示扫描热量分析实验结果表明4种HPV16疫苗Tm略显差异,约70℃左右;4种HPV18疫苗Tm值接近,集中在78℃;4种HEV疫苗Tm值差异性较大,HEV25、26约75℃,HEV27、28约60℃,表明铝佐剂会影响病毒样颗粒的稳定性。研究显示HPV16/18临床用苗和完成Ⅲ期临床的HEV疫苗益可宁Hecolin(R)的pH,粒径大小和PZC等各项理化参数与自行配制的疫苗相当。自行配制的HPV16/18疫苗免疫原性略高于临床用苗,配制的HEV疫苗也与即将商业化的HEV疫苗益可宁Hecolin(R)相当,从而表明本研究获得的铝佐剂可以用于优化疫苗配制。