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背景和目的膀胱癌（bladdercancer）是泌尿系统常见的恶性肿瘤,其发病率位居恶性肿瘤第6位,呈现逐年升高趋势。深入研究膀胱癌发生发展的分子机制,有助于发现可用于临床诊断和靶向治疗的关键分子。已有研究表明,死亡诱导终结因子1（death inducer obliterator,DIO或DIDO）DIDO1参与了多种肿瘤如:黑色素瘤、骨髓增生性肿瘤、食管癌等疾病的发生发展进程。但该基因在膀胱癌细胞中的生物学作用和分子机理尚未有相关报道。本课题的目的旨在探索DIDO1在膀胱癌细胞增殖中的生物学功能及其潜在的分子机理。方法1.用qPCR方法检测DIDO1基因在膀胱癌细胞株T24、5637和ScaBER中的表达水平。2.运用生物信息学方法,根据NCBI公布的DIDO1基因序列（NM033081）（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/301129164/）进行分析,确定特异性沉默 DIDO 1基因的片段。以慢病毒沉默载体GV115为工具构建DIDO1基因慢病毒特异性沉默载体（shDIDOl）及与其相对应的对照载体（shCtrl）,感染T24细胞,实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）和 Western blot 检测 DIDOl 沉默效率。3.采用Celigo法观察连续5天检测T24细胞的增殖情况,分析DIDOl基因沉默对T24细胞生长的影响;用MTT（噻唑蓝）法检测T24细胞连续5天的细胞活力情况,分析沉默DIDO1基因对细胞T24活力的影响;用Annexin V-APC单染试剂盒分别染色shCtrl和shDIDOl慢病毒载体感染的T24细胞,流式细胞术定量分析凋亡的细胞数量,分析DIDOl基因沉默对T24细胞早期凋亡的影响;将shCtrl和shDIDO1两组T24细胞分别进行Giemsa染色液染色20min,显微镜下计数T24细胞克隆,检测沉默DIDO1基因对膀胱癌T24细胞克隆形成能力的影响。4.将shCtrl和shDIDO1慢病毒感染的处于对数生长期的T24细胞（5×106个）接种在BALB/c裸鼠皮下,2周后开始测定移植瘤瘤体的长、宽、高,每周测定2次,连续观察3周。随后处死裸鼠,完整剥离移植瘤并称重,计算移植瘤体积的均值,分析DIDO1沉默对在体成瘤能力的影响。5.提取shCtrl和shDIDO1慢病毒沉默载体感染的T24细胞总蛋白,质量检测后;用 PathScan（R）Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit 检测差异信号分子;分析DIDO1基因沉默后相关信号分子的改变。结果1.qPCR结果表明,DIDO1在膀胱癌细胞株T24和5637中的表达显著高于在ScaBER中表达。2.PCR和测序结果表明,特异性DIDO1沉默片段己成功插入到GV115慢病毒沉默载体中;shCtrl和shDIDO 1沉默载体感染T24细胞后,qPCR检测结果表明:shDIDO 1组中DIDO1 mRNA的表达相对于shCtrl组中DIDO1 mRNA的表达显著下降（P<0.01）,其沉默效率为59.9%。而Western blot检测结果显示,与shCtrl组相比,shDIDO1感染的细胞其DIDO1蛋白的表达显著下降。3.Celigo计数法观察转染24小时后连续5天T24细胞的生长情况,结果表明,与第一天比较后的倍数,shDIDO1组细胞增殖明显低于shCtrl组（P<0.01）,特别是第 4 天（3.56±0.29）倍及第 5 天（5.04±0.39）倍,而 shCtrl 组第 4 天（9.21±0.27）倍和第5天（14.74±0.63）倍。以上结果提示DIDO1沉默抑制了 T24细胞的增殖。MTT法检测DIDO1沉默对T24细胞活力影响的结果表明,与第一天相比较,第4天和第5天细胞活力倍数变化:shCtrl组分别为（6.54±0.16）倍和（7.88±0.40）倍,shDIDO1 组分别为（3.26±0.28）倍和（4.21 士 0.08）倍,shDIDO1 组第 4 天和第 5天细胞活力显著低于shCtrl组（P<0.01）,说明DIDO1沉默引起T24膀胱癌细胞的活力显著下降（P<0.01）。流式细胞术检测结果表明,shCtrl组和shDIDO1组的早期凋亡细胞百分比分别为（4.95±0.08）%和（8.27±0.26）%,shDIDO1组与shCtrl组相比较T24早期凋亡细胞明显增加（P<0.01）。Giemsa染色检测DIDO1沉默对T24细胞的克隆形成能力的影响,结果表明,shCtrl组和shDIDO1组的细胞克隆形成数量分别为82±2个和7±4个,shDIDO1组的细胞克隆形成数量与shCtrl组相比下降明显（P<0.01）,显示DIDO1沉默显著抑制T24细胞的克隆能力。4.体内实验结束后测定瘤体的重量和体积结果显示,与shCtrl组相比,shDIDO1组的移植瘤重量明显降低（1.29±0.39 g vs.0.26±0.20 g,P<0.01）;瘤体体积的数据显示,shDIDO1组大鼠的瘤体体积亦显著低于shCtrl组（P<0.01）。5.PathScan（?）Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit 数据分析结果表明,与 shCtrl 组相比,DIDO1 沉默显著抑制了 SAPK/JNK（Thr183/Try185）、Chk1（Ser345）、Chk2（Thr68）、eIF2α（Ser51）的磷酸化水平以及 cleaved Caspase-7（Asp198）、总 IκBα总 Survivin 水平（P<0.01）。结论1.DIDO1基因沉默显著抑制膀胱癌细胞T24的活力、增殖和克隆,同时促进其凋亡。2.裸鼠移植瘤动物模型实验证实DIDO1基因沉默减缓了裸鼠移植瘤的生长。3.DIDO1沉默抑制膀胱癌T24细胞的增殖可能是通过激活SAPK/JNK信号通路进而促进CASP7及Chk1/2的合成而实现的。