目的 (1)制作带血供肌瓣作为BMP载体修复骨缺损的实验动物模型，探讨带血供肌瓣作为BMP载体修复骨缺损的可行性及骨骼肌的变化。(2)获取并培养骨骼肌卫星细胞，探讨其正常的分化方向。(3)观察BMP对骨骼肌卫星细胞粘附、增殖及分化等生物学特性的影响，以探讨带血供肌瓣作为BMP载体修复骨缺损的细胞生物学机制。(4)探讨逆转录病毒介导hBMP7基因转染骨骼肌卫星细胞的方法及可行性。 方法 (1)制作兔桡骨中下段15mm骨—骨膜完全性缺损，将去神经化的指深屈肌肌瓣转位至缺损区，作为BMP载体来修复骨缺损，通过大体、X线、组织学、TUNEL染色、电镜等方法观察成骨过程及骨骼肌的转归。(2)取大鼠肱三头肌，采用二步消化法分离骨骼肌卫星细胞，体外进行原代培养和传代培养。通过生长曲线、细胞融合率研究骨骼肌卫星细胞的增殖与分化能力，利用免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定。(3)用含BMP浓度分别为0、50、100、500、1000 μg／L的培养基进行培养，通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率，利用放射免疫法测定细胞层粘连蛋白的含量；通过MTT法测定细胞的增殖；通过HE染色观察细胞融合率；利用NPP法检测细胞ALP活性的改变；通过3H-脯氨酸掺入实验测定细胞胶原蛋白合成量；通过放射免疫法检测骨钙素含量的变化；通过RT-PCR检测细胞内ALP、Ⅰ型胶原蛋白、0C、0P等成骨细胞特异性蛋白在mRNA水平的表达。(4)制备含hBMP7基因的重组逆转录病毒液，感染骨骼肌卫星细胞，使用RT-PCR方法检测hBMP7在转染细胞中mRNA水平的表达。 结果 (1)骨骼肌逐渐发生萎缩，2 w时肌瓣内可触及串珠状团块，有大量软骨细胞生成，沿肌间隙分布。6 w时骨桥与宿主骨紧密结合，软骨溶解区有大量编织骨形成，出现骨髓腔并与宿主骨髓腔再通。8w时骨骼肌纤维几乎完全消失，新生骨组织呈条索状桥接两断端。组织学显示骨骼肌萎缩的同时，部分细胞核出现崩解，并有凋亡小体出现；TUNEL染色呈阳性，电镜观察细胞呈典型的凋亡样改变。（2）采用二步消化法可成功分离获得大鼠骨骼肌卫星细胞，在生长培养基作用下，细胞增殖旺盛；在分化培养基条件下，细胞分化良好，可融合成肌管。骨骼肌特异性蛋白a－sarcomet，ic actin和 myosin兔疫化学染色显不，骨骼肌卫星细胞弱阳性，肌管强阳性。（）BMP叮促进骨骼肌卫星细胞的粘附，在 500 u g／L的浓度时粘附率最高，BMP诱导后可促进骨骼肌卫星细胞层粘连蛋白的表达，当BMP浓度为500 p矿L时这种作用最强：BMP可促进骨骼肌卫星细胞的增殖，并随BMP浓度的增加这种作用愈发明显；BMP可降低骨骼肌卫星细胞的细胞融合率，增强骨骼肌卫星细胞的ALP活性，增加其胶原蛋白及骨钙素的含量；BMP可诱导骨骼肌卫星细胞在 mRNA水平上表达 1型胶原蛋白、骨钙素和骨涎蛋白。（4）经病毒液感染的骨骼肌卫星细胞中RT－PCR检测显示有hBMP mRNA的表达。 结 论（1）带血供肌瓣可作为 BMP的良好载体用于构建血管化的骨组织来修复骨缺损。（2）体外培养的骨骼肌卫星细胞具有良好的生长与分化能力，适用于进一步的实验研究。（）BMP可增强骨骼肌卫星细胞的粘附能力，其机制与层粘连蛋白的表达增高有关：SMP可促进骨骼肌卫星细胞的增殖，抑制其成肌表型而促进向成骨细胞分化。（4）采用逆转录病毒介导的方法可以将hBMP7转染至骨骼肌卫星细胞中，转人基因可在mRNA水平上有效表达。