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屏边三七为五加科人参属植物屏边三七Panax stipuleanatus H.T.Tsai et K.M.Feng的根及根茎,具有“散瘀止血,消肿定痛”之功效,含有齐墩果烷型五环三萜类皂苷成分,民间对于治疗肝炎具有良好的效果。目前屏边三七是一种待开发的、具有高经济价值的药用植物资源,但其主要药理活性尚不清楚。因此,本文初步考察了屏边三七皂苷的抗凝血、镇痛以及抗炎生物活性,进一步研究屏边三七皂苷对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其对小鼠粪便肠道菌群变化的影响,本次主要研究内容与结果如下:1.屏边三七皂苷R1(SP-R1)、R2(SP-R2)的生物活性初探1.1屏边三七皂苷的体外抗凝血作用。SP-R1、SP-R2能使凝血酶原时间(PT)以及活化部分凝血活酶时间(APTT)显著增加(p<0.01,p<0.001),且在0.520 mg/mL浓度范围内具有量效关系。1.2屏边三七皂苷的镇痛作用。SP-R1、SP-R2能提高小鼠痛阈值,表明其具有显著的镇痛活性。1.3屏边三七皂苷对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用。SP-R1在剂量为1、5、10 mg/kg时对小鼠耳廓肿胀的抑制率分别为29.73%、18.18%、21.38%;SP-R2在剂量为1、5、10 mg/kg时其抑制率分别为38.57%、30.63%、35.63%,SP-R2对小鼠耳廓肿胀的抑制作用较SP-R1更显著。1.4屏边三七皂苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀的抑制作用。SP-R1、SP-R2能显著抑制足组织内TNF-α、IL-6、MDA、NO含量的升高(p<0.05,p<0.01,p<0.001),减少炎症对组织的损伤。病理组织检查结果显示,SP-R1、SP-R2能降低角叉菜胶导致的小鼠足组织肿胀程度,减少组织损伤,且明显降低结缔组织炎性细胞浸润程度。1.5屏边三七皂苷对四氯化碳致(CCl4)小鼠急性肝损伤的保护作用。SP-R1、SP-R2(1、10 mg/kg)能显著降低丙氨酸氨基转移酶(ALT)酶活力(p<0.05,p<0.01);在1、5、10 mg/kg剂量下,SP-R1、SP-R2均能显著降低天门冬氨酸氨基转移酶(AST)酶活力(p<0.05,p<0.01)。2.SP-R1、SP-R2对四氯化碳致小鼠急性肝损伤保护作用的机制初探2.1屏边三七皂苷降低小鼠血浆中致炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量。SP-R1、SP-R2在剂量为1、5、10 mg/kg时均能显著抑制TNF-α及IL-1β水平(p<0.05,p<0.01,p<0.001);SP-R1、SP-R2均能抑制IL-6水平,其中SP-R2在剂量为10 mg/kg时,能显著抑制IL-6水平(p<0.01)。2.2屏边三七皂苷能抑制氧化应激反应,提高机体抗氧化能力。SP-R1、SP-R2在1、5、10 mg/kg浓度下时能显著抑制丙二醛(MDA)的释放(p<0.001);同时,SP-R1、SP-R2能促进谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)的释放,提高机体抗氧化及清除自由基的能力,SP-R1剂量为1、10 mg/kg,SP-R2剂量为1 mg/kg时能显著促进GSH的释放(p<0.05),而当SP-R1剂量为1 mg/kg,SP-R2剂量为5 mg/kg时能显著提高机体SOD酶活力(p<0.05,p<0.05)。2.3 Western Blot分析表明,SP-R1、SP-R2能上调IκBα表达量,下调NF-κB的表达量。2.4病理组织检测肝脏组织情况。SP-R1、SP-R2能恢复肝细胞正常功能与形态,减少细胞坏死程度,其中SP-R2对肝脏细胞的保护作用最显著。3.SP-R2对CCl4致小鼠急性肝损伤中肠道菌群变化的影响。SP-R2能提高急性肝损伤小鼠的肠道菌群多样性及丰富度;在门、纲、目水平上改变急性肝损伤小鼠粪便肠道菌群的物种组成,与空白组相近。通过基于加权Unifrac的PCoA分析,与模型组相比,SP-R2组菌落结构更接近于空白组。通过LEfse分析,得到组间差异功效最大的类群。