去甲肾上腺素对益生乳酸杆菌生长、抑菌和抗ETEC感染能力的影响

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断奶仔猪腹泻是一种常发病,也是引起仔猪死亡的重要原因之一,每年都带来巨大的经济损失。目前断奶仔猪腹泻的发病机制尚不明确,如何科学有效的防治断奶仔猪腹泻,已成为疾病防控中的重要科学问题。临床上使用益生菌调节仔猪肠道生态平衡防治断奶仔猪腹泻取得积极进展,但是,益生乳酸菌在不同的个体、不同的养殖场作用效果差异很大。仔猪在断奶应激的时候体内儿茶酚胺类激素会明显升高,这些激素对益生乳酸菌的影响尚未见到报道。本研究拟以去甲肾上腺素作为儿茶酚胺类激素的代表探讨应激激素对乳酸杆菌的生长、抑菌作用、抗感染能力的影响,为解析乳酸菌临床应用作用不稳定的问题提供理论依据。本试验利用血清-SAPI培养基模拟体内环境考察去甲肾上腺素对益生乳酸杆菌的生长、活菌数、抑菌能力、产酸能力和产过氧化氢能力的影响。而后建立产肠毒素大肠杆菌(ETEC)标准株CVCC230感染BALB/c小鼠模型,探究去甲肾上腺素对益生乳酸杆菌抗ETEC大肠杆菌感染能力的影响,检测小鼠组织荷菌量、肠道病理变化、十二指肠氧化损伤情况、十二指肠炎症因子和肠粘膜屏障相关因子的表达情况、以及小鼠的肠道菌群,评估去甲肾上腺素对乳酸杆菌的作用。主要结果如下:(1)生长曲线的测定表明去甲肾上腺素会促进大部分(70%)乳酸杆菌菌株的生长,在24h后去甲肾上腺素对乳酸杆菌的促进作用更明显,对部分(20%)乳酸杆菌的生长影响不大,还会抑制少数(10%)乳酸杆菌的生长。(2)活菌数测定试验表明,在24h内促进作用更明显,所有乳酸杆菌菌株的活菌数均呈现增加趋势。(3)去甲肾上腺素明显降低了乳酸杆菌对ETEC、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌能力。(4)乳酸菌和大肠杆菌共培养条件下,去甲肾上腺素明显增加了大肠杆菌的活菌数。(5)去甲肾上腺素增强了多数乳酸杆菌菌株的产酸能力。(6)通过建立ETEC标准株CVCC230感染小鼠模型,主要得到了以下结果:a组织荷菌量的观察显示,去甲肾上腺素明显减弱了乳酸杆菌23017对ETEC大肠杆菌定殖肠道的抑制作用。b肠道病理切片的观察发现去甲肾上腺素明显减弱了乳酸杆菌23017对ETEC大肠杆菌感染引起十二指肠病变的保护作用。c对十二指肠氧化损伤指标的测定结果发现,在去甲肾上腺素的作用下,23017+CVCC230组的SOD、GSH-PX和T-AOC的活性下降,MDA的活性升高,去甲肾上腺素明显降低了乳酸杆菌23017对ETEC大肠杆菌造成的氧化损伤的保护作用。d对小鼠肠道菌群的检测结果发现,去甲肾上腺素增加了23017+CVCC230组小鼠肠道中病原菌,例如巴氏杆菌和幽门螺旋杆菌的相对丰度,而降低了益生菌,例如乳酸杆菌和双歧杆菌的相对丰度,提示去甲肾上腺素降低了乳酸杆菌对肠道中病原菌的抑制能力。以上结果显示,去甲肾上腺素可以促进多数益生乳酸杆菌的生长,增强多数乳酸杆菌菌株的产酸能力,但却降低了抑制ETEC、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的能力,减弱了乳酸杆菌23017抗ETEC感染的能力,减弱乳酸杆菌对机体的保护作用。本研究结果可为断奶仔猪腹泻的预防与治疗提供新的数据参考和理论支持,为更好地应用乳酸菌提供新思路。
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