鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）皮层蛋白VP16由位于病毒基因组长独特序列（Long unique region,UL）的UL48基因编码,是DEV重要的功能蛋白。本研究通过在鸭胚成纤维细胞（Duck embryo fibroblast,DEF）中表达VP16及其截短突变体,对VP16在抗病毒天然免疫中的功能进行研究,获得以下结果:1.VP16蛋白抑制DEF细胞中IFN-β的转录水平及转录激活将1MOI鸭肠炎病毒接种于鸭胚成纤维细胞,RT-qPCR检测感染后不同时间点鸭IFN-β的mRNA转录水平,结果表明,鸭IFN-β的mRNA转录在感染24h时明显下调,与感染12h时相比降低了85%。在DEF细胞中转染VP16真核表达质粒,瞬时表达VP16蛋白,发现其能剂量依赖性的抑制IFN-β的mRNA转录,表达VP16蛋白的重组表达质粒在DEF细胞中的转染量为10μg/9.6 cm2时对IFN-βmRNA转录水平的抑制效果较4μg/9.6 cm2细胞的转染量增加了3倍左右。运用双荧光素酶报告基因检测系统,检测DEF细胞中VP16对IFN-β的启动子活性的影响。结果表明,表达VP16蛋白的实验组中,poly I:C激活的IFN-β启动子的活性被下调了80%,与对照组相比差异显著（p<0.01）。过表达cGAS、STING和IRF7均能明显的诱导DEF中的IFN-β启动子的激活,感染DEV或者瞬时表达VP16都能显著的抑制cGAS、STING和IRF7诱导的IFN-β启动子的激活,抑制效果与对照组相比差异极显著（p<0.001或p<0.005）。2.VP16蛋白抑制IFN-β激活免疫通路的作用位点筛选在DEF细胞中瞬时表达VP16蛋白能同时抑制poly I:C和poly d A:d T激活的抗病毒效应分子Mx蛋白和OASL蛋白的mRNA转录,VP16下调的poly I:C诱导的Mx蛋白mRNA转录水平与对照组相比具有统计学差异（P<0.05）;VP16下调的poly I:C诱导的OASL蛋白mRNA转录水平与对照组相比差异显著（P<0.01）。VP16下调poly d A:d T诱导的Mx蛋白和OASL蛋白mRNA转录水平与对照组相比均差异极显著（P<0.001）。表明VP16蛋白作用于DNA病毒识别的天然免疫通路与RNA病毒识别的天然免疫通路的共同节点。在DEF中过表达DNA受体cGAS识别的天然免疫通路中的各节点免疫分子蛋白,过表达cGAS/STING、TBK-1、IRF7或IRF1蛋白均能激活IFN-β的启动子活性,但当与VP16蛋白同时表达时,cGAS/STING、TBK-1和IRF7激活的IFN-β启动子活性均被下调,与对照组相比抑制水平差异显著或极显著（P<0.005或P<0.001）。但VP16蛋白不能抑制由IRF1激活的IFN-β启动子活性,IFN-β启动子活性只降低15%以下。表明VP16蛋白作用于TBK1下游的IRF7。3.VP16蛋白作用于IRF7的分子机制的初步研究利用真核表达细胞系HEK293T共转染表达VP16蛋白和IRF7蛋白,在HEK293T细胞中进行免疫荧光共定位和免疫共沉淀实验,结果VP16能与IRF7共定位于细胞质;免疫共沉淀实验检测到VP16可与IRF7结合。表明VP16与IRF7关联。进一步检测不同的截短VP16蛋白对DEF中IFN-β启动子活性的影响效果,结果表明,截去了大部分C端的VP16（aa1-200）蛋白对poly I:C诱导的IFN-β启动子活性的抑制效果比截去部分N端的VP16（aa110-475）蛋白多70%并且差异显著（p<0.05）。综上,DEV逃逸由cGAS受体识别并激活的天然免疫通路,VP16是其发挥免疫逃逸功能的重要蛋白。VP16通过与IRF7结合,从而抑制IFN-β介导的抗病毒天然免疫,VP16发挥其免疫抑制作用的区域位于其N端。