微生物酶法拆分DL-泛解酸内酯

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunnymurder
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泛酸,即维生素B5,广泛存在于生物界中,是动物体内合成辅酶A的主要原料,其主要作用是参与糖、脂肪和蛋白质的代谢,广泛应用于医药、饲料和食品等领域。D-泛解酸内酯是D-泛酸合成过程中重要的手型中间体,生产D-泛酸的关键技术是DL-泛解酸内酯的手性拆分技术。对比采用昂贵手性拆分剂的化学拆分方法,微生物酶法拆分具有原料成本低,条件温和,易于操作,环境友好等优点。通过比较各种生物法的拆分路线,本课题采用选择性水解D型内酯的路线,即用D-立体专一内酯水解酶水解消旋内酯中的D-泛解酸内酯,得到D-泛解酸,再通过内酯化得到D-泛解酸内酯,而L-泛解酸内酯经过消旋化可以反复使用。该路线不要求水解彻底,反应时间短,得到的产品D-泛解酸内酯光学纯度高,反应容易控制,而且底物的浓度可以达到很高的水平。本文通过筛选得到一株具有较高D-泛解酸内酯水解酶活性的菌株Fusarium avenaceum3.4594,并以生物量和酶活为指标考察该菌的产酶发酵条件,确定其培养最佳条件是温度28℃,培养基初始pH 5.0,培养72h。海藻酸钙包埋的方法固定化菌体,明显提高菌体酶的稳定性和重复利用率,且易于保藏。同时以相对酶活和固定化收率为指标评价了固定化条件,确定了最佳固定化条件,固定化细胞粒径2.5mm,CaCl2溶液的浓度30g·L-1,固定化时间为1h,海藻酸钠的浓度为24 g·L-1,包埋率为200 g·L-1。以固定化的细胞为催化剂,考察了催化的条件,其最佳催化条件为温度30℃,pH 7.0左右,固定化细胞的加入量在30-40g/100ml底物溶液,底物浓度为100-200g·L-1,催化时间为14h之内,水解率30%左右,最终得到产物的ee值为90.1%ee以上。
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