稳定高表达和低表达GRβ的系膜细胞株的建立及其生物学特性研究

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本文利用逆转录病毒介导的稳定转染技术,将重组的糖皮质激素受体β(GRβ)正义和反义基因转入大鼠肾小球系膜细胞,G418筛选阳性克隆,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和基因测序,验证插入hGRβ基因的正确性,采用Westemblot检测细胞内GRβ蛋白表达水平;通过流式细胞术和MTT比色法检测脂多糖(LPS)诱导下的GRβ不同表达水平的肾小球系膜细胞增殖状态、以及其对地塞米松抑制细胞增殖的反应性,研究GRβ在糖皮质激素效应产生中的作用。研究结论如下:成功构建了稳定高表达和低表达GRβ的肾小球系膜细胞株;肾小球系膜细胞内GRβ表达水平高低是决定糖皮质激素效应敏感抑或抵抗的重要因素。
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