猪早期闭锁卵泡基因表达芯片分析

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在雌性哺乳动物卵泡发育过程中,只有极少数卵泡能发育成熟并排卵,绝大部分卵泡(70%-99%)在此过程中退化,最终被机体清除,这一过程称之为卵泡闭锁。哺乳动物卵泡发育的各个过程都有可能发生闭锁,这是一种正常的繁殖生理过程。卵泡闭锁是一种有多因素参与的复杂调控过程,长期以来许多人都对卵泡闭锁进行了大量研究工作,但迄今为止调控闭锁过程的确切分子机制仍未被完全理解,还需要进一步的研究和探索。阐明卵泡闭锁的分子机制对于提高动物繁殖力、丰富繁殖理论、促进胚胎工程发展、治疗人类不孕等都有着十分重要的意义。本文的实验动物为成熟的杜洛克×长白×约克夏母猪,采用三种不同的标准,主要是外观形态观察和卵泡液孕激素/雌激素(P4/E2)比例综合判定卵泡闭锁程度,将所取卵泡分为健康、早期闭锁、晚期闭锁三组。为了获得在猪卵泡闭锁期间基因转录图谱变化的综合评价,本文用基因芯片分析不同闭锁状态的猪卵巢中的卵泡,然后用实时荧光定量PCR验证6个基因(CYP11A1, IRG6, ALCAM, STAR, VEGFA, CYP19A3)的表达差异,这6个基因分别代表了3个上调基因和3个下调基因。基因芯片的数据表明,在健康卵泡中一共有12,601个探针点表达,在早期闭锁卵泡中有13541个探针点表达,并且11858个探针点在健康卵泡和早期闭锁卵泡中都有表达。在健康卵泡和早期闭锁卵泡之间差异表达的有652个转录点,其中211个转录点上调,441个转录点下调。在652个差异表达的转录点中,有629个转录点匹配UniGene数据库中的注释基因,其中210个和419个转录点分别代表显著上调和下调的独特的基因。进一步的GO分析显示,这些差异表达基因参与在25个生物过程类别中。KEGG分析表明,38个潜在的信号传导通路与早期卵泡闭锁过程相关,包括ECM-受体相互作用,粘着,TGF-β信号传导通路,MAPK信号传导通路,Wnt信号传导通路,mTOR信号传导通路,胰岛素信号传导通路和细胞周期等。实时RT-PCR证实了6个被选定的基因的表达模式。实时RT-PCR结果与基因芯片数据之间有着显著的相关性。所有的基因在这两种方法中都表现出了相似的表达趋势,这表明了该基因芯片分析的可靠性。这些结果提供了一个对早期卵泡闭锁,包括潜在的候选分子和调控途径的新的全面的看法,这值得进一步研究来寻找关于猪卵泡闭锁的分子机制的新的见解,并有助于提高母猪的繁殖效率。
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