青海血蜱幼蜱cDNA表达文库的构建及其免疫学筛选

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:junlintianxiap
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青海血蜱是我国首次命名的一种体外寄生虫,它除可通过叮咬吸血使宿主生产性能降低外,还可以传播多种血液原虫病,严重制约着我国蓄牧业的发展。本实验构建了青海血蜱幼蜱的cDNA表达文库,经测定末扩增的初级文库的库容量为5.0×10~5 PFU/ml,扩增后库容为8×10~9 PFU/ml;用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清进行免疫学筛选,对筛选到的阳性噬菌体进行亚克隆,提取质粒,转化宿主菌JM109。测序分析结果表明:共得到幼蜱阳性克隆11个,分别命名为HqL01、HqL02、HqL03、HqL04、HqL05、HqL06、HqL07、HqL08、HqL09、HqL10、HqL11,通过与已知序列进行比对,其中6个为新基因,将序列HqL07、HqL08、HqL09、HqL11提交至GenBank/NCBI获取序列号,序列号分别为EF605263、EF605264、EF605265、EF605266。选择可能具有较好免疫原性的HqL07、HqL08、HqL09基因进行表达,表达产物的分子量为60kD、35kD、70kD,通过western blot进行初步免疫学鉴定,发现分子量为60kD的HqL07基因的表达产物具有较好的免疫原性。
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