鹦鹉热衣原体属于衣原体科衣原体属,是一种专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌。是引起人类、家禽、鸟类及多种哺乳动物感染的一种人兽共患病病原体。鹦鹉热衣原体不仅对家禽业的有序发展造成严重的干扰,也对人类的健康形成严重的威胁。目前国内对动物衣原体病的诊断主要依赖于间接血凝试验(IHA),由于衣原体感染动物具有自身的的抗体消长规律,通过IHA检测时可能出现假阴性现象。为避免抗体消长造成的检测假阴性结果,针对该病原体开发新的诊断方法显得尤为重要。根据沙眼衣原体质粒PGP3蛋白在感染人期间持续分泌的特性,选择该鹦鹉热衣原体质粒PGP3蛋白基因作为研究的靶点,为准确检测鹦鹉热衣原体病提供理论依据。以兰州广场观赏鸽粪便中提取总基因组DNA为模板,根据GenBank鹦鹉热衣原体Pgp3基因序列(DQ414846.1)设计合成1对特异性引物,对目的片段进行PCR扩增,连接到pMD-18T载体并进行测序鉴定。对测序无误的序列进行生物信息学分析,显示鹦鹉热衣原体PGP3蛋白与沙眼衣原体PGP3蛋白具有相似的二级、三级结构,表明鹦鹉热衣原体PGP3蛋白可能具有与沙眼衣原体PGP3蛋白相似的特性。将Pgp3基因构建至pET30a表达载体上,转化至BL-21(DE3)表达菌中,对表达蛋白进行纯化,Western-blot结果显示目的蛋白反应较弱,而非特异性条带与阳性血清反应强。转化至Rosetta(DE3)表达菌中,表达纯化蛋白具有相同的Western-blot结果。将Pgp3基因构建至pGEX-6P-1表达载体中,转化至Rosetta(DE3)表达菌中表达,通过对表达、纯化条件进行优化,纯化的目的蛋白Western-blot结果反应良好,且无非特异带存在。进一步ELISA试验表明PGP3蛋白具有良好的抗原性。