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研究背景糖尿病肾病是糖尿病重要的微血管并发症之一,已成为导致终末期肾病(end stage of renal disease,ESRD)的主要病因。足细胞是一种高度分化的肾实质细胞,它与肾小球内皮细胞、肾小球基底膜共同构成了肾小球滤过屏障。糖尿病肾病早期就会出现足细胞功能和结构的损伤,进而引起足细胞凋亡及脱落,导致肾小球滤过屏障完整性被破坏和蛋白尿生成。足细胞的损伤伴随着蛋白尿的产生,并参与了糖尿病肾病的发生发展。因此,它既是糖尿病肾病进展的重要因素,也是临床治疗的重要靶点。髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,MYDGF),是一种由C19orf10基因编码的分泌蛋白,主要由骨髓来源的单核细胞和巨噬细胞产生。我们前期研究发现,MYDGF能够促进肠道L细胞合成和分泌GLP-1,从而改善2型糖尿病小鼠的糖脂代谢。但是,MYDGF在糖尿病肾病中的作用尚不明确。研究目的探索MYDGF对糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用及作用机制。研究方法体内实验,以C57BL/6小鼠为原型制作MYDGF+/-小鼠模型,使其交配获得同窝出生的野生型和MYDGF-/-小鼠。第一部分,探索MYDGF基因敲除对糖尿病肾病小鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响。第二部分,探索外源性增加MYDGF对糖尿病肾病小鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响。主要检测包括ELISA法检测尿蛋白/肌酐比值,PAS染色分析肾小球形态,蛋白免疫印迹检测肾小球中足细胞特异性蛋白和信号通路蛋白的表达,免疫荧光染色分析足细胞凋亡。电子显微镜观察足细胞的形态。第三部分,探索MYDGF对足细胞的作用机制。肾脏进行siRNA/AKT干扰后,观察小鼠的尿蛋白及足细胞损伤的情况。体外实验,选取非糖尿病野生型小鼠足细胞和肾小球组织,高糖培养后,加入 100ng/mL 的重组 MYDGF(recombinant MYDGF,rMYDGF),实验结束后,流式细胞仪检测足细胞凋亡情况,提细胞内蛋白进行蛋白免疫印迹分析。研究结果体内实验结果显示MYDGF基因敲除加重糖尿病肾病小鼠蛋白尿、肾小球损伤和足细胞损伤,而外源性增加MYDGF能改善糖尿病肾病小鼠中蛋白尿、肾小球损伤和足细胞损伤。体外培养非糖尿病野生型小鼠源性足细胞(MPC5)和非糖尿病野生型小鼠的肾小球组织结果显示,rMYDGF可以增加足细胞内特异性蛋白Nephrin蛋白表达水平,减少足细胞凋亡。机制方面,MYDGF可能通过激活AKT/BAD信号通道来保护足细胞。结论及创新性本实课题首次发现MYDGF可以改善糖尿病肾病中足细胞损伤,降低蛋白尿的产生,延缓糖尿病肾病的进展。该发现为寻找糖尿病肾病提供了新的治疗靶点与实验基础。