【摘 要】
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BS-Z15是从连作棉田土壤中分离筛选出的一株高效拮抗大丽轮枝菌的枯草芽孢杆菌。前期研究表明,该菌株通过发酵能产生胞外分泌型次生代谢产物,且该产物具有良好的环境稳定性及高效的拮抗大丽轮枝菌活性,是防治棉花黄萎病良好的候选活性物质。本研究以BS-Z15菌株及其抗大丽轮枝菌次生代谢产物为研究对象,探究其全基因组组分及功能注释,并优化出其抗菌代谢产物的最适发酵条件。本研究中,共测序和组装了大约4.06M
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BS-Z15是从连作棉田土壤中分离筛选出的一株高效拮抗大丽轮枝菌的枯草芽孢杆菌。前期研究表明,该菌株通过发酵能产生胞外分泌型次生代谢产物,且该产物具有良好的环境稳定性及高效的拮抗大丽轮枝菌活性,是防治棉花黄萎病良好的候选活性物质。本研究以BS-Z15菌株及其抗大丽轮枝菌次生代谢产物为研究对象,探究其全基因组组分及功能注释,并优化出其抗菌代谢产物的最适发酵条件。本研究中,共测序和组装了大约4.06MB大小的全基因组序列,共组装得到7个scaffolds并预测出4196个蛋白质编码基因及序列。我们在枯草芽孢杆菌BS-Z15中共预测到了大量的与细胞功能相关的基因与157个潜在的碳水化合物活性酶和CAZy酶编码基因,48.4%与PPD相关,而GH和PL组中PDD相关蛋白的比例分别为69.7%和7.8%。我们对BS-Z15和其它12个芽孢属物种全基因组构建系统发生树,发现BS-Z15与菌株B.Subilits ALBA01相似性最高。选取与B.SubilitsBS-Z15相似性较高的九个有完整基因组序列的同源菌株的scaffolds进行两两比较。结果表明,10株菌基因组序列存在广泛的差异和结构重组现象。BS-Z15具有与生物膜产生、铁载体、细胞外酶和抗生素(表面活性素)相关的已报道过的与拮抗细菌抑菌功能有关的43个基因。同时发现,BS-Z15中未鉴定出芽孢杆菌属种中通常产生抗生素的基因——芬荠素、伊枯草菌素,推测BS-Z15所产生的抗大丽轮枝菌活性物质与目前报道的抗生素有所差异。通过生理生化实验表明,BS-Z15菌体可产生动力,可还原硝酸盐具有还原性,可利用葡萄糖、甘露糖,无法利用木糖及柠檬酸盐作为唯一碳源进行氧化发酵。BS-Z15所产抗大丽轮枝菌活性物质抑菌谱较广,不仅对常见的青霉曲霉具有抑制作用,对于动、植物病原菌均有良好的抑制作用。且该活性物质对白色念珠菌孢子具有一定杀伤、致死作用。正交优化设计筛选最适碳源、氮源、无机盐及最佳浓度,最佳培养基配方为即葡萄糖1.50%、酵母浸粉1.00%、Mn SO4·H2O0.15%、Na2HPO4-Na H2PO4 0.10%。优化后的最佳培养基所对应的抑菌圈面积为18.83mm,抑菌能力比基础发酵培养基提高15.93%,达到了优化目的。添加天冬氨酸(Asp.)、精氨酸(Arg.)、缬氨酸(Val.)、亮氨酸(Leu.)促进了BS-Z15的生长,谷氨酸(Glu)可使活性物质的抑菌能力增强。菌株BS-Z15的抑菌活性物质对不同来源的真菌均具有不同程度的抑制作用,枯草芽孢杆菌BS-Z15次级代谢产物中存在大量对动植物病原菌具有高效抑菌性的芽孢杆菌,这对于促进动、植物生防技术的进步具有重要意义。
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