鸡马立克氏病(Marek’s disease, MD)是由马立克氏病毒(Marek’s disease virus, MDV)引起的一种鸡的恶性淋巴肿瘤疾病,是鸡的三大肿瘤病之一。目前乃至将来相当长的一段时间里它在养鸡业中都具有重要的经济意义。错配修复基因(mismath repair gene, MMR)是细胞内负责对碱基错配进行修复的基因,它们的缺陷会导致肿瘤相关基因的突变不能被及时有效纠正,从而使得宿主易感肿瘤。此类基因中MLH1和MSH2占主要地位,它们的功能是在生理状况下可以表达丰富的蛋白产物来维持基因的稳定性,当其发生突变、缺失或其他改变时,会影响其正常表达,出现错配修复功能障碍,其表现为不能对宿主DNA的碱基的转换和颠换突变进行识别和修复,因而使某些抑癌基因失活或一些肿瘤基因被激活,最终导致宿主细胞凋亡或肿瘤形成。本试验是对健康鸡的MMRMLH1基因以及对患MD鸡的肿瘤组织中的MLH1基因突变情况和蛋白表达情况进行研究。旨在探索鸡的MLH1基因与MD肿瘤发生的关系。试验分两大部分,第一部分是检测了MLH1基因的19对外显子基因突变情况,具体操作是先通过HE染色确定患鸡的肿瘤组织和正常组织,再分别从中提取DNA,以NCBI上公布的MLH1基因DNA序列的19对外显子序列来设计引物,进行PCR扩增,PcR产物进行琼脂糖凝胶电泳,确定为目的条带后,通过PCR-SSCP技术来检测MD同一只鸡的肌肉组织和内脏组织间有无条带的差异,来推测MLH1基因是否存在基因突变。结合SSCP和病理切片结果,提取病灶明显的同一只鸡的肿瘤组织和健康组织的DNA,并以其为模板,MLH1基因的19对外显子引物,进行PCR扩增,经验证条带单一后,扩大PCR体系并将产物纯化后测序分析。用DNAstar软件对正常组织和肿瘤组织的DNA序列测序结果进行比对,寻找确定是否存在核酸层次的改变(碱基改变、插入、缺失等)和氨基酸层次的改变,判定MLH1基因有无基因突变。第二部分用免疫组化染色方法检测MLH1基因在MD肿瘤组织中的蛋白表达情况,鉴别肿瘤细胞的类型。具体做法是将福尔马林固定的肿瘤组织做常规的石蜡切片,分别进行(苏木精伊红)HE和免疫组化(常规IHC和T/B淋巴细胞)染色,检测肿瘤病灶和灶旁组织的MLH1基因表达情况。试验结果为通过PCR-SSCP检测,未检测到有条带的差异,即未检测到MLH1有基因突变。通过HE染色发现2号鸡的肝脏组织呈现结节性病灶,对其提取DNA并进行测序,经过软件DNA star比对后,肝脏肿瘤和健康组织的DNA序列未发现有差异,即从核酸层次也未发现MLH1基因存在基因突变。通过免疫组化方法检测到患有MD的病鸡的肾脏肿瘤组织肿瘤病灶和灶旁组织的MLH1蛋白表达上有差异,瘤旁组织细胞胞浆MLH1基因表达阳性,肿瘤病灶处细胞MLH1基因呈低表达或不表达。通过T/B淋巴细胞免疫组化检测到肾脏的肿瘤细胞是CD3表达阳性染成蓝黑色的的T淋巴细胞,即鸡的马立克氏肿瘤可能是T淋巴细胞瘤。