杨树皮层组织内生细菌区系分析及新种鉴定

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欧美杨(Populus×euramericana),与其转Bt基因品种健杨94’(Populus×euramericana cv. Robusta94)、改良的三倍体毛白杨(Populus tomentosa),是杨树无性系栽培品种中应用推广较多的两种品系,其在林木培育和木材生产等方面,具有相当重要的生产应用价值。本研究通过对这两个杨树品种树干皮层组织内生细菌的物种多样性、群落组成及其优势种群季节动态变化规律研究,了解这两种杨树体内潜在病原菌以及生防菌等有益微生物,以期发现细菌新种为生物进化提供数据,同时,为杨树病虫害防治、有益微生物的开发利用奠定基础。利用传统的细菌分离培养,结合生理生态和16S rDNA序列分析等鉴定方法对2011-2012年分离到的两种杨树内生细菌进行了区系分析,并通过形态观察,生理生化指标测定,DNA-DNA杂交技术,全细胞脂肪酸测定等化学和分子生物学分类技术鉴定了其中两株新细菌,取得以下主要成果:(1)两种杨树干部皮层经8次分离纯化,共计细菌菌株31属,69种,共532株,16S rDNA序列分析及生理生化鉴定结果表明,从欧美杨中分离得到内生细菌17属,32种,以根瘤菌属(Rhizobium)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)和微杆菌属(Microbacterium)3个属为主;从健杨94’中分离得到的内生细菌16属,22种,以根瘤菌属、微杆菌属为主;从三倍体毛白杨中分离得到的内生细菌18属,30种,其中以根瘤菌属、芽孢杆菌属(Bacillus)、橙单胞菌属(Aurantimonas)、纤维菌属(Cellulomonas)为主,这说明了杨树树干皮层组织中内生细菌的丰富性和多样性。它们的优势种群整体来看为根瘤菌属,但是优势种群并不完全一致,欧美杨与健杨94’的优势种群是一致的,但欧美杨和三倍体毛白杨的优势种群却存在差异,这说明改变植物基因性状,同品种的杨树优势种群不会发生较大的变异,但不同品种的两种杨树内生细菌会出现差异。(2)两种杨树内生细菌数量季节变化规律没有完全一致,欧美杨和健杨94’的变化规律是一致的,但是欧美杨与三倍体毛白杨的变化规律却不一致,但总体表现为温暖季节均高于寒冷季节。两种杨树在四个季节的优势菌群也各不相同,随季节变化而变化,但是在冬季表现出一致性,均以Rhizobium为主,这说明随着季节的变化,两种杨树内生细菌数量和种类的变化既表现出差异性也表现出同一性。(3)菌株13BinDT和10-107-8T均从欧美杨上分离得到,经16S rDNA序列分析鉴定,分别与Lampropeida hyaline JCM21380T和Microbacterium halotolerans JCM13013T的相似性为96.61%、97.40%,形态、生理生化特征、细胞脂肪酸成分分析表明菌株符合Lampropedia和微杆菌属(Microbacterium)的基本特征,而两株菌株在生理生化特征、基于16S rDNA序列和gyrB(促旋酶亚基基因)的系统发育分析、DNA-DNA杂交结果,G+C含量测定结果都表明其不同于L. hyaline和M.halotolerans,为两个细菌新种,建议命名为Lampropedia puyangensis nov.sp和Microbacterium populi nov.sp。前者为革兰氏阴性菌,后者为革兰氏阳性菌。二者都能在pH7,30℃,NA上生长良好。前者的主要脂肪酸成分为C16:0, C16:1,C18:1ω7c,G+C含量测定为57mol%,后者的主要脂肪酸成分为anteiso-C15:0,iso-C16:0, anteiso-C17:0,C+C含量为57.28mmo1%。
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