【摘 要】
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木糖是木质纤维素中含量较高的单糖,木糖的代谢是木质纤维素能被广泛应用的关键,现木糖已被广泛应用于生产乙醇,脂肪酸,PHA等多种产物。目前有研究发现,木糖更适合用于生产以乙酰辅酶A为前体的化合物。本文构建了以木糖为唯一碳源生产原人参二醇(Protopanoxadiol,PPD)的耶氏解脂酵母工程菌株,并对工程菌株分别在木糖和葡萄糖中的发酵进行对比。以耶氏解脂酵母ATCC 201249为出发菌株,导入
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木糖是木质纤维素中含量较高的单糖,木糖的代谢是木质纤维素能被广泛应用的关键,现木糖已被广泛应用于生产乙醇,脂肪酸,PHA等多种产物。目前有研究发现,木糖更适合用于生产以乙酰辅酶A为前体的化合物。本文构建了以木糖为唯一碳源生产原人参二醇(Protopanoxadiol,PPD)的耶氏解脂酵母工程菌株,并对工程菌株分别在木糖和葡萄糖中的发酵进行对比。以耶氏解脂酵母ATCC 201249为出发菌株,导入了异源的木糖代谢路径,过表达了内源的木糖代谢模块,并通过实验室驯化,得到了能够高效利用木糖的工程菌Y4。然后,将异源的原人参二醇合成模块导入木糖代谢菌株,以木糖为唯一碳源的发酵中,成功检测到了PPD,得到了18.18 mg/L的PPD。通过蛋白融合、过表达MVA途径中的t HMG1,erg9和erg20关键基因及优化木糖代谢路径,得到了最终的工程菌Y14,Y14在以木糖为底物的摇瓶发酵中得到了80 mg/L的PPD,PPD的产量明显提高。在5 L发酵罐的分批发酵中,在木糖和葡萄糖为唯一碳源中的PPD产量分别是98.23 mg/L和60.72 mg/L。在补料发酵中,以葡萄糖为底物发酵的PPD产量是167.17 mg/L(得率为1.194 mg/g(糖),生产能力是1.548 mg/L/h,在木糖中PPD产量达到了300.63 mg/L(得率为2.505mg/g(糖);生产能力是2.505 mg/L/h),是葡萄糖发酵的1.8倍。这表明了木糖相较于葡萄糖更利于PPD的合成。本文首次尝试了在耶氏解脂酵母中利用木糖生产萜类化合物的研究,并且证明了以耶氏解脂酵母为平台生产以乙酰辅酶A为前体的化合物,木糖比葡萄糖具有更大的优势及潜力。通过调控木糖利用及产物合成的代谢工程策略,能够实现以木糖为底物高效合成三萜类化合物,为其他萜类化合物在耶氏解脂酵母中的生产奠定了基础。
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