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【目的】以滇西云岭北段为调查和研究的空间范围,小型兽类、家畜动物(牛、羊)和犬为研究对象,采用巢式PCR进行嗜吞噬细胞无形体16Sr RNA基因扩增及测序分析,了解滇西云岭北段小型兽类、家畜动物(牛、羊)和犬感染噬吞噬细胞无形体的状况,为合理制定防控措施提供依据。【方法】【方法】1.样本采集以滇西云岭北段为调查和研究的空间范围,共采集样本1096份。其中小型兽类602份(采自德钦、维西、香格里拉县境内的白茫雪山东坡141份、西坡71份、阿东村52份、霞若乡66份、羊拉乡95份、翁水村31份、东旺乡24份、格咱乡11份、尼西乡4份、中甸乡3份、建塘镇2份、三坝乡15份、滇金丝猴保护区52份、糯阁村20份和攀犬阁村15份);犬315份(采自德钦县云岭乡73份、佛山乡73份、升平镇13份、燕门镇58份、羊拉乡28份、霞若乡70份)。家畜动物179份(采自德钦县45份牛血,香格里拉县110份牛血、24份羊血)2.DNA提取操作步骤按QIAFEN血液、组织DNA提取试剂盒进行。3.PCR扩增采用巢式PCR方法扩增无形体属16Sr RNA片段。4.电泳PCR扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察结果。5.序列测定和分析将PCR阳性产物进行测序,测序结果作Blast同源性比较,最后运用MEGA6.0软件与Gen Bank收录的其它无形体属种株进行系统发生分析。【结果】【结果】1.共检测小型兽类4目7科16属29种共602只,从5属6种小型兽类中检出阳性标本10份,总阳性率为1.66%。2.检出的小型兽类阳性标本与加拿大(HG916766.1)、俄罗斯、西伯利亚(HM366583.1)检出的AP在同一分支,同源性达99%。与俄罗斯(HQ629925.1)、斯洛文尼亚(AF481855.1)、中国湖北(HQ872463.1)、吉林(DQ449948.1)、德国(AY706390.1)、法国(EU857671.1)、西班牙(AY829457.1)不同宿主动物如刺猬、蜱、羊等感染无形体株聚在同一大分支,但相距较远。3.315份犬血中扩增到目的片段共18份,总阳性率为5.71%(18/315),其中中华田园犬的阳性率为7.14%(12/168),藏犬的的阳性率为5.13%(4/78),哈巴犬的阳性率为2.99%(2/67),狼犬中未检出AP。4.所检出的当地犬感染的嗜吞噬细胞无形体16Sr RNA基因与Gen Bank中收录的无形体属16Sr RNA基因序列的同源性高达99~100%。进化树分析结果显示当地无形体分为2类流行株,将其命名为Yunnan HGA1和Yunnan HGA2,分别占检出菌株的16.67%和83.33%。Yunnan HGA1与在乌拉圭,西伯利亚和远东地区发现的全沟硬蜱中检测到的无形体片段(HM366583)亲缘性较高,同源性达100%,Yunnan HGA2与加拿大发现的肩突硬蜱中检测到的无形体片段(HG916766)同源性为99%。5.共检测家畜动物179份,17份阳性样本均为牛,总阳性率为9.50%(17/179),羊未检出AP。6.所检出的当地牛阳性标本与中国AP序列(GQ900613.1、HM64175.1、GQ499995.1、GQ500045.1)、法国(JX841254.1)、地中海(EU436154.1)在同一大分支且亲缘性较高,同源性达97-99%,与新疆北部(KJ459350.1)、中国(GQ500058.1)在同一大分支,但相距较远。【结论】【结论】提示滇西云岭北段家畜动物(牛、羊)、犬和小型兽类均存在嗜吞噬细胞无形体的感染,阳性率分别是9.50%(17/179)、5.71%(18/315)、1.66%(10/602)。序列分析表明当地宿主动物感染的嗜吞噬细胞无形体呈现基因多样性,进一步开展相应媒介、宿主及人群感染情况调查十分必要。