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防御素(defensins)是机体内产生的一类主要的内源性抗菌肽,包括五个亚家族,即α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素和植物防御素。其中β-防御素主要分布在脊椎动物的皮肤、粘膜等上皮组织,构成机体抵御微生物侵袭的第一道化学屏障,所以,β-防御素被确认为黏膜表面抗微生物屏障的组成成分。已有研究报道在哺乳动物牛、羊、猪、骆驼、鼠、猴以及人体内均有β-防御素的表达。本研究为了检测reBD-1 mRNA在驯鹿体内可能的表达器官,根据已知的reBD-1 cDNA序列设计了一对预计扩增产物为121bp的引物,以驯鹿舌、食管、瘤胃、网胃、皱胃、十二指肠、回肠、结肠、肝、肺、气管、肾、膀胱、睾丸、附睾、心脏、脾脏中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测驯鹿的上述器官内reBD-1 mRNA的表达情况。结果显示:reBD-1 mRNA在上述组织器官中均有表达,其中在舌、瘤胃、睾丸中表达最强;在食管、十二指肠、结肠、气管、脾脏中有中等量的表达;在网胃、皱胃、回肠、肝、肺、肾、膀胱、附睾、心脏内的表达较弱。β-防御素reBD-1在驯鹿体内的广泛表达提示reBD-1有助于驯鹿的先天性宿主防御。为了进一步确定reBD-1在器官组织内的表达部位,本实验选择了舌、回肠及肾脏等组织器官,利用扩增出的300bp驯鹿β-防御素reBD-1 cDNA为探针,探针经地高辛标记后应用原位杂交技术检测reBD-1 mRNA的表达部位。结果显示:应用reBD-1 cDNA探针杂交,在驯鹿舌背表面的复层扁平上皮、回肠隐窝上皮中和肾小管及肾小囊上皮内均有杂交信号。在舌背表面的复层扁平上皮中reBD-1 mRNA的杂交信号强度不一,杂交信号主要在中层上皮中,浅层角化的上皮和基底部上皮中基本上无杂交信号,但在舌的整个锥状乳头的上皮内有杂交信号。这说明reBD-1 mRNA在舌的角化层的上皮和基底层内不表达,而在舌的中层以及整个锥状乳头的上皮内大量表达reBD-1 mRNA。在回肠隐窝的中、上部柱状上皮细胞中有强的杂交信号,而在隐窝的底部上皮细胞中无杂交信号。肾的肾小管和肾小囊壁层及脏层上皮中均有杂交信号,表明在实质性器官肾内也表达在上皮细胞内。