HLA-G在卵巢癌细胞株SKOV-3中表达的实验性研究

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目的:人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)属于非经典的HLA-Ⅰ类抗原分子(HLA-Ⅰb),早期的研究发现HLA-G的表达仅局限于母-胎界面的绒毛外细胞滋养层,对其与妊娠的关系研究较多,后来研究发现在人类恶性肿瘤有所表达,HLA-G与肿瘤的关系引起人们的关注。卵巢癌细胞株SKOV-3是经典的人类卵巢恶性肿瘤细胞株之一,本研究以绒毛膜癌细胞株JEG-3中HLA-G mRNA及蛋白的表达为阳性对照,研究体外培养的卵巢癌细胞株SKOV-3中人类白细胞抗原G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)的表达,以期为探讨肿瘤的发生发展提供新的思路和理论依据。方法:分别应用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerasechain reaction,Rt-PCR)、免疫细胞化学法及流式细胞术方法三种方法在基因和蛋白水平上检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G的表达,以绒毛膜癌细胞株JEG-3中HLA-G mRNA及蛋白的表达为阳性对照:(1)体外培养的卵巢癌细胞株SKOV-3,生长到细胞密度为5×104个/ml时,收集细胞,用Trizol法提取细胞RNA,应用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chainreaction,Rt-PCR)检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G mRNA的表达;(2)将卵巢癌细胞株SKOV-3细胞以5×104个/ml的细胞密度接种在已铺有无菌盖玻片的6孔板内,37℃,5%CO2下生长48小时后取出盖玻片,在室温下按照免疫细胞化学试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)中的步骤进行实验,免疫细胞化学法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G蛋白的表达。(3)卵巢癌细胞株SKOV-3细胞生长至5×104个/ml的细胞密度时消化收集细胞处理成单细胞悬液,处理后采用流式细胞术方法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G蛋白的表达。结果:(1)Rt-PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明SKOV-3细胞中有HLA-G mRNA的表达,其中HLA-G1:764bp HLA-G2:488bpHLA-G3:215bp HLA-G4:491bp HLA-G5:886bp HLA-G6:610bp HLA-G7:360bp(2)以细胞表面及细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准,免疫细胞化学显色显示SKOV-3细胞膜及细胞浆内有HLA-G的表达。(3)流式细胞术结果提示SKOV-3细胞中HLA-G的阳性率是33.77%。结论:卵巢癌细胞株SKOV-3表达HLA-G,提示HLA-G参与了卵巢癌肿瘤细胞的免疫逃逸,对维持SKOV-3的恶性生物学特征发挥重要的作用。
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