酶,催化特异性高、专一性强,常被作为一种分析试剂或分析工具,可以用来检测样品在某些物质中的含量。人们常利用酶的特性检测物质的存在,但大部分是通过检测酶促反应产物络合物的量来间接检测底物的存在,步骤繁琐,精密度以及准确度难以保证。本论文以蔗糖酶与α-淀粉酶为研究对象,试图建立一种检测底物的新方法。工作内容如下:酶发生酶促反应后,酶结构发生变化,利用荧光光谱分析法研究了各种酶的荧光光谱图以及底物对酶荧光猝灭速率的影响,发现不同的酶荧光猝灭速率不同,底物影响酶荧光猝灭速率但未出现规律性,因此不能用此方法检测底物。我们发现酶促反应液中出现游离氨基酸增多的现象,且加入底物的量与反应液中游离氨基酸的量成正比,因此通过检测游离氨基酸的量来表征底物的量,采用茚三酮比色法考察了反应温度、p H、蔗糖酶浓度等因素对游离氨基酸量的影响。结果表明:在优化条件下因反应变化的游离氨基酸的量y与蔗糖浓度x在0.02%~0.08%范围内呈线性关系,线性方程为y=351.67x+0.0217(R2=0.9997),方法检出限为37.07μg/m L,相对标准偏差为1.75%~5.11%,方法加标回收率为96.32%~101.31%。α-淀粉酶同样有此现象,方法检出限、相对标准偏差、加标回收率分别为1317μg/m L、2.79%~5.88%、92.82%~100.86%。此方法简便、快捷、准确可靠、经济实用。