猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由冠状病毒科,冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、水样腹泻、脱水和食欲下降为主要临床症状,各种年龄猪均易感。该病广泛分布于我国及世界各个养猪国家,给养猪业造成了严重的经济损失。本实验通过对湖南地区60头腹泻仔猪进行剖解,取肠道及其内容物进行RT-PCR检测,发现其中有39头仔猪感染了PEDV,腹泻疑似病料PEDV阳性检测率为65%。对S基因部分片段进行核苷酸序列测定,并与PEDV参考株进行比较发现,湖南地区流行的PEDV毒株与河南、黑龙江、广东省流行的毒株相似。猪流行性腹泻病毒S基因编码的S蛋白是PEDV的主要结构蛋白,是病毒囊膜外的纤突蛋白,能够识别靶细胞,促进病毒和细胞膜融合,在病毒的侵入、中和抗体的产生及免疫介导中起重要作用。本实验研究通过PCR方法扩增S基因中第2983nt-3927nt区域,将其命名为S’基因,并将S’基因克隆到原核表达载体pET-28a (+)中,构建了重组原核表达质粒pET-28a-S’,将其转化到宿主表达菌BL21(DE3)中,S’基因成功的得到表达。通过对表达的S’蛋白进行纯化,得到了纯度达90%以上的重组蛋白。Western blot检测说明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。将其作为抗原包被酶标板,优化间接ELISA试验条件,成功的建立了一种检测PEDV抗体的间接ELISA方法。通过对湖南地区收集的639份血清进行检测,检出总阳性率为53.1%。