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红脂大小蠹(Dendroctonus valens Le Conte,Red Turpentine Beetle,RTB)是中国林业重大外来入侵害虫,原产于北美地区。在我国主要危害松属植物,自传入以来已致死上万公顷的松林。生物防治措施是目前解决红脂大小蠹防治难题的有效途径之一。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)在自然界中分布广,寄主多,对多种昆虫有持续感染力,是目前生物防治体系中研究和应用最广泛的昆虫病原真菌之一。除此之外,肠道作为昆虫的重要组织,栖息着大量的微生物,昆虫肠道细菌对宿主的健康起到至关重要的作用。但是,目前红脂大小蠹的肠道细菌是否参与病原真菌对昆虫的侵染尚不清楚。本研究主要通过获取无菌红脂大小蠹幼虫、Miseq宏测序、真菌侵染等技术方法评估RTB肠道细菌是否参与宿主抵抗外来病原真菌,分析球孢白僵菌对RTB肠道菌群多样性和结构的影响。并进一步分析球孢白僵菌侵染及致病过程中昆虫肠道菌群变化显著的关键细菌,探讨关键细菌与病原真菌之间的互作关系。主要研究结果如下:(1)证实肠道细菌存在可以促进球孢白僵菌致死红脂大小蠹试验选择分离自红脂大小蠹的球孢白僵菌菌株Bb093,对有肠道菌和无肠道菌的红脂大小蠹3龄幼虫进行生物测定。试验选择了浓度为1×10~3孢子/m L、1×10~4孢子/m L、1×10~5孢子/m L和1×10~7孢子/m L的球孢白僵菌进行侵染,有菌和无菌的红脂大小的半致死时间分别为5.90±0.34d/8.73±0.09d、5.86±0.33d/7.61±0.37d、4.67±0.26d/6.25±0.66d、3.64±0.88d/5.45±0.16d。不同浓度侵染的生物测定均表明:有肠道菌的红脂大小蠹死亡速率显著快于无肠道菌的红脂大小蠹。(2)球孢白僵菌显著影响RTB肠道细菌群,导致欧文氏菌属相对丰度显著增高选择浓度为1×10~7孢子/m L的球孢白僵菌以及吐温感染的红脂大小蠹,对其肠道菌群进行多样性分析发现:在16个具有代表性的红脂大小蠹肠道样本中,我们基于OTU分类地位鉴定,共鉴定了15个门、26个纲、60个目、99个科、160个属和192个种。除此之外,被球孢白僵菌感染后扰乱了红脂大小蠹肠道菌群。病原真菌的入侵导致红脂大小蠹肠道菌物种多样性降低,并且物种组成结构发生改变。原本的优势菌群相对丰度降低,但是,红脂大小蠹肠道内的欧文氏菌(Erwinia sp.)丰度占比达到94.06±3.78%,显著增多。(3)明确欧文氏菌可加速球孢白僵菌对RTB的致死为了验证差异细菌——欧文氏菌(Erwinia sp.)在病原真菌侵染RTB过程中的作用,我们通过饲喂方式将欧文氏菌B306回接到无菌的RTB肠道中,再利用浓度1×10~7孢子/m L球孢白僵菌侵染。结果表明:球孢白僵菌分别侵染无菌RTB和回接欧文氏菌B306的RTB,两组半致死时间分别为:8.35±0.12d和6.17±0.73d;并且后者血淋巴中的细菌含量显著增多。因此,肠道细菌——欧文氏菌可以加速病原真菌侵染RTB的速度,从而协同球孢白僵菌致死RTB