目的1.分别建立检测大鼠肝微粒体中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔原型及代谢产物的高效液相色谱(HPLC)方法,评价大鼠肝微粒体中CYP 2C9、CYP 2C19、CYP 1A2、CYP 3A4和CYP 2D6酶的活性,研究穿心莲内酯对肝微粒体中CYP 450五个亚型酶活性的体外影响。2.建立同时检测大鼠血浆中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔的超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)的方法,研究穿心莲内酯对5种探针药在大鼠体内的药代动力学的影响,为临床合理用药提供理论依据。方法1.以甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔这5个药作为底物,采用Agilent ZORBAX SB-C 18色谱柱分离,色谱流动相均采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系。采用差速离心法制备肝微粒体并且测定肝微粒体浓度。大鼠肝微粒体分别加入以上五个底物,在37oC条件下孵育一定时间后,终止反应,经有机相提取后,用建立的HPLC方法测定底物及其代谢物的浓度,根据米氏方程分别计算五个底物的Km值。然后分别以五个底物Km值附近浓度作为底物浓度,分别将不同浓度的穿心莲内酯加入到上述体系中,以计算半数最大抑制浓度(IC50)。2.雄性SD大鼠12只,将其随机分成2组(对照组和穿心莲内酯组),每组为6只。其中对照组给予生理盐水灌胃,剂量为5 ml/kg,1天给药1次,连续给药七天;穿心莲内酯组给予穿心莲内酯灌胃,剂量为10 mg/kg,1天给药1次,连续给药七天。第七天最后一次给药30 min后,2组动物同时灌胃给予甲苯磺丁脲1 mg/kg、奥美拉唑10 mg/kg、非那西丁5 mg/kg、咪达唑仑10 mg/kg以及美托洛尔20 mg/kg;在给予5个探针药后不同时间点尾静脉分别进行采血0.3 ml,分离血浆。用建立的UPLC-MS方法同时测定血浆中5个探针药的浓度;用DAS 3.0程序分别计算5个探针药的主要药代动力学参数(Cmax,CLz/F,Tmax,t1/2,AUC(0-t),AUC(0-∞)),用SPSS 17.0软件比较2组主要药代动力学参数的差异。结果1.100μM的穿心莲内酯可以明显抑制大鼠肝微粒体CYP 450五个亚型酶的活性,穿心莲内酯对大鼠肝微粒体中5个底物的半数最大抑制浓度(IC50)分别是2.654μM、1.113μM、9.608μM、16.40μM和20.67μM。2.穿心莲内酯可以增加甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔的血药浓度以及生物利用度。与对照组相比,穿心莲内酯组可使甲苯磺丁脲的清除率下降、峰浓度增加以及生物利用度升高,而半衰期和达峰时间则无统计学差异;穿心莲内酯使奥美拉唑、非那西丁和美托洛尔峰浓度和生物利用度升高,而半衰期、清除率和达峰时间则无统计学差异;穿心莲内酯对咪达唑仑的主要药动学参数均无统计学差异。结论1.本研究建立的HPLC分别检测大鼠肝微粒体中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑和美托洛尔及其的代谢物方法,专属性高,分离完全,检测时间快,适合CYP 450酶五个亚型酶药代动力学研究。2.建立的同时检测大鼠血浆中甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑以及美托洛尔的UPLC-MS的方法,检测时间快、分离完全、灵敏度高,适用于甲苯磺丁脲、奥美拉唑、非那西丁、咪达唑仑以及美托洛尔的同时检测及其药代动力学的研究。3.穿心莲内酯在体内外均可以抑制CYP 450酶的代谢,因此,临床穿心莲内酯与CYP450五个亚型酶底物合用时,应密切关注穿心莲内酯对相应底物代谢的影响并进行治疗药物监测。