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目的:缺血再灌注损伤是临床外科与内科治疗中导致治疗效果和预后受到影响的重要生理病理反应。尤其是在重要组织器官在因各种疾病原因的条件下导致血液灌注不足或完全阻断,经过治疗解除病因后,组织器官重新获得血流灌注,但是会出现引起组织细胞损伤凋亡的炎症反应。目前绝大多数研究证实HMGB-1蛋白是参与此类炎症反应损伤的重要炎症因子,但对其在病理学层次上的表达与RIRI的炎症反应关系的研究较为缺乏,本文设计了以SD大鼠为研究对象而建立的肾脏缺血再灌注损伤模型,来探索HMGB-1蛋白的表达与肾脏缺血再灌注损伤炎症反应的关系,不同处理方式和不同缺血时间与HMGB-1蛋白表达水平的变化情况以及肾脏损伤的程度。同时从病理学的层面为临床上需要阻断肾脏血流的相关治疗(如肾部分切除手术等)提供一个合理人为控制的缺血时间,起到预防性减少缺血再灌注带来的损伤和指导治疗方案的理论依据。方法:本实验通过将健康SD大鼠分为假手术组(Sham组)、单纯缺血组(I组)、缺血再灌注组(IR组)3组,分别对其进行缺血5min、15min、30min、40min的时间控制,预先处理为右肾独肾后进行缺血及缺血再灌注实验。(1)Sham组大鼠麻醉后仅作游离肾周组织并寻找到肾蒂的操作,并不阻断肾血流,等待相应时间后给予抗生素抗感染,逐层缝合伤口,复苏并置于单独鼠笼观察,24h后再次麻醉获取肾脏标本与血液标本。(2)I组大鼠麻醉后找到肾动脉并阻断,等待相应时间后直接获取肾脏标本与血液标本。(3)IR组大鼠麻醉后找到肾动脉并阻断,等待相应时间后解除阻断恢复血流灌注,给予抗生素抗感染,逐层缝合伤口,复苏并置于单独鼠笼观察,24h后再次麻醉取得肾脏标本与血液标本。(4)肾脏标本置于4%多聚甲醛液中固定,予以HE染色镜检,Tunel细胞凋亡检测以及HMGB-1蛋白免疫组化检测,血液标本保存于-4℃冰柜内进行血清肌酐检测。(5)最后采用SPSS 22.0软件对所得的数据进行分析,实验结果以“均数±标准差”表示,利用统计学中多因素析因方差分析法处理实验数据,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:(1)Sham组与处理组:HMGB-1蛋白表达水平在缺血时间相同时,Sham组与处理组在缺血时间为5min、15min时无明显差异(P=0.146、P=0.216,P值>0.05),在缺血30min、40min时,具有显著差异(P值均<0.001);Tunel细胞凋亡百分比中,Sham组与I组在缺血15min、30min、40min时差异具有统计学意义(P=0.029、P=0.017、P<0.001,P值均<0.05),与IR组在缺血30min、40min时具有显著差异(P=0.041、P<0.001,P值均<0.05);SCr值检测中,Sham组与I组在缺血30min、40min时有显著差异(P=0.008、P<0.001,P值均>0.05),Sham组与IR组在40min时SCr值具有明显差别(P<0.001)。(2)两处理组之间比较:在缺血时间相同的情况下,HMGB-1蛋白表达水平中,缺血时间为15min、40min的时候,I组和IR组HMGB-1指标的差异均有统计学意义(P值分别是P<0.001和P=0.014<0.05);Tunel细胞凋亡百分比中,两处理组之间的细胞凋亡水平的比较具有明显差别(P值均<0.05),缺血5min、15min、30min后,细胞凋亡程度在I组中高于IR组,缺血40min后,IR组高于I组且具有明显差异;SCr值检测中,缺血时间分别为30min和40min时,两处理组之间的SCr值比较差异均有统计学意义(P值分别是P<0.001和P=0.001)。(3)I组组内比较:在缺血时间不同的情况下,HMGB-1蛋白表达水平中,缺血40min时HMGB-1蛋白的表达水平与缺血5min、15min、30min时具有显著差异(P值均<0.001);Tunel细胞凋亡百分比中,缺血时间为40min时表达的水平明显高于缺血时间为5min、15min、30min组(P值均<0.001);SCr值检测中,缺血时间为40min时血肌酐值明显高于缺血时间为5min、15min、30min时(P值均<0.001)。(4)IR组组内比较:在缺血时间不同的情况下,HMGB-1蛋白表达水平、Tunel细胞凋亡水平、SCr值的差异比较与I组结果相同,缺血时间为40min时观察值表达水平明显高于缺血时间为5min、15min、30min时(P值均<0.05)结论:(1)HMGB-1蛋白参与了RIRI的炎症反应,其表达与RIRI炎症反应的严重程度和肾单位的损伤程度呈正相关。(2)缺血达30min、40min后再灌注所产生的损伤显著高于缺血5min、15min时产生的损伤。(3)单纯阻断肾血流达到30min、40min后造成的肾单位损伤会明显高于缺血5min、15min时肾单位的损伤。(4)在本实验中缺血时间为40min以内时,单纯缺血对肾脏造成的损伤总体来说高于缺血24h再灌注后对肾脏造成的损伤。