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唾液腺分子在蜱吸血和传播病原过程中起着很重要的作用,如抗凝血、抗炎症和抑制宿主免疫反应,从而有利于病原传播。本论文根跟据实验室前期构建的cDNA文库数据,以亚洲璃眼蜱唾液腺吸血后表达差异的二个小肽分子Ha-11和P18为对象,进行其功能鉴定。 亚洲璃眼蜱多肽Ha-11的编码基因开放阅读框(ORF)为372bp,编码123个氨基酸,其中含23个氨基酸的信号肽,生物信息学分析表明该多肽无高度同源性分子,为功能未知的唾液腺多肽。将去除信号肽的编码区基因亚克隆至pGEX-4T-1载体,大肠杆菌中诱导表达,获得了37kDa重组蛋白。抗重组Ha-11蛋白的免疫血清识别半饱血雌蜱的唾液腺中约11kDa的天然蛋白。Real-timePCR结果表明该基因在亚洲璃眼蜱的各发育阶段、各组织中均有表达,但各发育阶段中以若蜱表达量最高,而组织中以淋巴液表达量最高。重组蛋白在体外可以抑制脾细胞增殖和细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。研究结果显示Ha-11在蜱吸血过程中可能具有抗炎作用。 亚洲璃眼蜱唾液腺多肽P18的编码基因开放阅读框架ORF为465bp,编码154氨基酸,有一个16个氨基酸的信号肽。生物信息学分析表明该多肽无高度向源性分子,为功能未知的唾液腺多肽。利用表达载体P18/pET-32a/BL21表达蛋白,制备抗血清。WesternBlotting分析表明在唾液腺中以天然形式存在。Real-timePCR表明该基因在若蜱、唾液腺中大量表达。脾细胞增殖实验表明,重组蛋白抑制脾细胞增殖并且抑制脾细胞上清中TNF-α、IFN-γ的表达。P18基因的RNAi结果发现对于亚洲蜱的饱血率、孵化率有较大的影响,实验组24h上体率相对对照组由33.75%下降至17.5%,孵化率由18.75%下降至8.88%。 实验证明唾液腺两个小肽在吸血过程中起着重要的意义。