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本实验采用免疫组织化学技术并结合一般病理形态学观察及生物化学方法,研究大鼠实验性颅脑损伤后脑组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibriliary acidic protein,GFAP)与血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的表达变化与损伤时间的关系。实验组用针刺法造成大鼠右顶叶脑挫伤后,按30min,1h,3h,6h,12h,1d,3d,7d,14d,21d不同时间分批处死动物并立即取出全脑,同时颈静脉取血2ml,正常对照组不造成颅脑损伤,直接处死动物后立即取材。将脑组织以挫伤灶为中心,旁开1mm行大脑全冠状切面取材,常规石蜡包埋,4μm切片,作免疫组化GFAP染色观察,同时行HE染色对照,采用计算机彩色图像分析技术对染色结果作定量测定;将所取静脉血离心,测定血清中SOD和NO的变化情况。 结果表明: 1.伤后30min即可见GFAP阳性细胞散在于损伤区周围,但突起较短,染色较浅,伤后3d组在损伤区周围GFAP阳性细胞增多,胞体增大,染色加深,伤后7d组阳性细胞数量减少,着色变浅,突起变短,21d时受伤组与正常对照组基本看不出明显差别。 2.分析受伤侧与非受伤侧各时间段之间GFAP阳性细胞平均光密度和阳性率的差别,各时间段与3d组均有明显的差别,而双侧大脑各时间段除3d组外均与正常对照组无显著性差别。 3.所有观察对象双侧大脑均可见GFAP阳性表达,且各时间段受伤侧与非受伤侧之间无显著性差别。 4.SOD活力在伤后30min即开始下降,至7d时降至最低,然后逐渐上升,至21d时基本恢复正常。 5.NO浓度在伤后3h降至最低,然后上升,至7d时升至最高,然后下降,21d时基本恢复正常。 从以上结果分析表明,脑挫伤后GFAP及血清中SOD活力和NO浓度的变化有一定的时间规律性,可用于颅脑损伤的时间推断,且三者存在一定的相关性,联合应用更能提高推测的准确性。