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目的:干性年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是发达国家65岁以上人群主要的致盲性眼病,属于视网膜退行性疾病的范畴,此类疾病的病理基础是视网膜神经元细胞的不可逆性损伤,目前临床尚无有效的治疗手段。近年细胞替代治疗方法的出现,使视网膜退行性病变的修复成为可能。最新研究发现,通过动员机体自身骨髓来源细胞(bone marrow stem cells,BMCs)亦可达到修复组织损伤的作用,相比传统的骨髓干细胞移植方法更加安全易行。因此,促进自身BMCs动员及其在病变处的归巢、定向分化很可能成为干细胞治疗的新途径。补肾益精方(BSYJ方)是我们临床常用的治疗干性AMD的基本方,前期临床观察发现其能显著改善患者视功能。中医理论中的“精”在内涵和功能上与干细胞具有相似性。基于以上原因,本研究拟探讨补肾益精方促进自身BMCs修复干性AMD损伤的作用及可能机制。方法:1.以碘酸钠诱导的干性AMD小鼠模型作为研究载体,将模型动物随机分为中药组及蒸馏水对照组(对照组),中药组每日予BSYJ方灌胃,对照组以蒸馏水灌胃,以未造模的正常动物为正常对照(正常组),常规饲养。碘酸钠造模小鼠于造模后第一天给药,给药7天、14天、28天后观察视网膜电图(electroretinogram,ERG)和组织病理学指标。2.造模、分组、给药方法同上。分别于治疗后7天、14天、28天处死动物,眼眶取血,采用流式细胞仪检测外周血液中Lin-/Sca-l+/c-kit+细胞数量。同时,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)、基质细胞衍生因子-lα(stromal cell derived factor-1,SDF-1α)及其受体趋化因子受体-4(CXC chemokinereceptor 4,CXCR-4)的含量。3.造模、分组、给药方法同上。造模后第1天,移植绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠(遗传背景为C57/BL6小鼠)的BMCs。每只小鼠经尾静脉注射细胞数3×106,次日开始治疗。分别于治疗后7天、14天、28天处死小鼠,眼眶取血,视网膜组织匀浆,采用ELISA方法检测外周血及视网膜组织SDF-1α、CXCR-4含量。取小鼠眼球,分离视网膜-脉络膜-巩膜复合体,放射状切开铺片,激光共聚焦显微镜下观察携带GFP的BMCs在整个视网膜的分布情况。取小鼠视网膜,采用Western-Blotting方法半定量观察视网膜细胞间黏附因子(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)以及粘纤连蛋白(fibronectin,FN)的蛋白水平。4.造模、分组、给药方法同上,分别于治疗后7天、14天、28天利用RT-PCR检测视网膜睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF),成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),脑源性神经营养因子(brain derived neurotrhophic factor,BDNF)mRNA 表达。结果:1.与正常组比较,造模后对照组和中药组ERG各项指标均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗7d、14d、28d后,与对照组比较,中药组明视条件ERG潜伏期a、潜伏期b、振幅b显著改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗14d和28d后,与对照组比较,中药组明视条件ERG振幅a显著改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗28d后,与对照组比较,中药组暗适应条件ERG振幅a、振幅b,最大混合反应振幅a、振幅b,振荡电位振幅Toal,30Hz闪烁光振幅显著改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗14d和28d后,视网膜感光细胞形态和数量显著改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.治疗7d后,中药组外周血Lin-/Sca-1+/c-kit+细胞相对数量与对照组和正常组比较显著增高(P<0.05)。治疗7d、14d和28d后,中药组外周血G-CSF、SDF-1α及其受体CXCR-4含量与对照组相比显著增加(P<0.05)。3.治疗7d、14d和28d后,中药组视网膜组织归巢GFP-BMCs数量较对照组组显著增加(P≤0.01)。治疗14d和28d后,对照组外周血和中药组视网膜组织SDF-1α及CXCR-4含量较对照组显著增加(P<0.01)。治疗7 d、14 d、28d后,视网膜组织ICAM-1表达显著增加(P<0.05)。治疗14d和28d后,视网膜组织FN表达显著增加(P<0.05)。4.治疗7d,14d和28d,与对照组比较,视网膜组织中CNTFmRNA表达均显著增加(P<0.05)。治疗14d和28d后,视网膜组织BDNF和bFGF mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论:1.BSYJ方对干性AMD具有保护作用,能延缓干性AMD疾病的进程。2.BSYJ方对碘酸钠诱导干性AMD小鼠BMCs具有动员、迁移作用,这可能与增加相关细胞因子C-GSF含量,启动SDF-1α/CXCR-4信号轴有关。3.BSYJ方能促进BMCs向损伤的视网膜归巢,这可能与其能增加黏附分子ICAM-1和FN的表达有关。4.BSYJ方能延缓干性AMD病理改变,这可能与促进BMCs归巢和其旁分泌CNTF、BDNF和bFGF等神经营养因子有关。