反义pBI121-NR-LEACS2双价表达载体的构建及其向番茄的转化

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乙烯作为影响果实采后生理的重要因子,同时又是控制果实成熟衰老的关键所在,所以一直是人们采后研究的一项重要内容。近年来,在模式植物拟南芥中乙烯感受和信号转导的研究取得了很大的进展。但在果蔬成熟衰老研究的模式材料番茄中乙烯受体及信号转导的研究还不够深入。到目前为止,已从番茄中分离到六个乙烯受体基因,即ETR1的同源物LeETR1-6,但其功能还远远没有被认识。利用分离到的番茄乙烯受体基因,参考拟南芥乙烯信号转导模式,搞清楚番茄乙烯受体基因的功能,已成为我们研究的重点。在六个番茄乙烯受体基因中,NR(LeETR3)是比较特殊的一个。其表达受果实发育严格调控,并表现出与跃变型果实乙烯生物合成变化趋势完全一致。从NR基因的表达时机判断,它很可能是启动系统Ⅱ乙烯的关键因子。 本文构建了反义pBl121-NR-LEACS2双价植物表达载体并通过农杆菌介导法将其导入番茄,研本究将有助于搞清NR蛋白的功能及其对乙烯生物合成的反馈调控机制,也有助于丰富乙烯理论及果实成熟衰老机制。本研究取得的主要结果如下: (1) pBI121-NR用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后获得35S-NR(反向)-nos小片段,将其连接到pGreen0029载体上,构建了第一个中间载体pGreen0029-NR (2) pGreen0029-NR用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后获得35S-NR(反向)-nos小片段,将其连接到pLP100载体上,构建了第二个中间载体pLP100-NR (3) pLP100-NR用EcoRⅠ单酶切获得35S-NR(反向)-nos小片段,pBI121-LEACS2用EcoRⅠ单酶切获得大片段,二者连接后获得反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体 (4) 采用冻融法将反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体转入土壤农杆菌EHA105 (5) 利用农杆菌介导法将反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体转入中蔬4号番茄品种,经过PCR检测共获得7株PCR阳性植株
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