本论文以马氏珠母贝(Pinctada martensii)为研究对象,通过染色观察来检测其精子活率、形态及质膜结构的完整性。以期为精子质量检测方法在贝类上的运用提供基础数据,为贝类精子质量检测体系的建立提供参考。1.曙红Y染色法检测马氏珠母贝活精率的研究:取性腺发育良好的雄贝精液作为检测样品。选择曙红Y、结晶紫等几种常规染料对马氏珠母贝精子进行染色处理,初步筛选出能用于马氏珠母贝精子质量检测的染料。在筛选出适合染料后进一步研究染色液浓度及染色时间等指标,在此基础上对染液毒性、精子自然死亡率等指标进行检测,并对染色后的实际死亡率和“理论死亡率”进行相关性分析,总结分析出马氏珠母贝精子的最佳染色方法。结果发现:经曙红Y染色后,活精子不着色,死精子着红色。对染液毒性等指标进行检测后表明,曙红Y染色法可用于马氏珠母贝精子的检测与质量评价,该检测方法灵敏、准确,结果可靠。曙红Y染色最适染液浓度为0.04%(终浓度),染色时间以15min为最佳。2.两种染色方法评定马氏珠母贝精子形态效果比较:以不同方法来制作马氏珠母贝精液抹片,选择曙红Y及结晶紫染液对抹片进行染色处理,显微镜下对精子形态进行观察分类,并确定主要的畸形类型及各畸形的特点。结果发现:精液与2%曙红Y染液等比混合后抹片,精子头部着深红色,尾部着浅红色,背景为浅粉红色,对比明显,精子各部分结构清晰,形态特征明显,背景干净,易于观察。在制好的精液压片边缘滴加0.5%的结晶紫染液,使用渗透染色的方法使染料渗入且均匀分布,再拉开或揭开两张玻片,得到两张精子抹片,干燥后显微镜下精子头部着深紫色,尾部着浅紫色,背景颜色为淡粉红色,对比明显,各部分结构清晰,染色特征明显,可较准确的对精子形态特征作出判断。马氏珠母贝精子畸形主要集中在精子的颈部和尾部,头部畸形情况较少。检测结果显示两种染色方法均可用于其形态检测,但就制片难易程度而言,推荐使用曙红Y染色法。3.结晶紫水试验评价马氏珠母贝精子膜功能完整性的观察:吸取适量马氏珠母贝精液于干净玻片上,滴加一滴蒸馏水并混匀,加盖玻片后沿玻片边缘滴加适量0.5%结晶紫染液,在玻片另一端用吸水纸吸取染液,使染液均匀渗入玻片,于40×10倍显微镜下观察精子尾部的肿胀情况,并进行计数统计分析。同时使用曙红Y染色法检测精子活率来进行对比分析。结果显示:马氏珠母贝精液在蒸馏水中发生尾部肿胀现象,精子着深紫色,背景粉色,对比明显,易于观察。尾部肿胀率与曙红Y染色测得精子活率经差异性检验表明,二者之间并无显著性差异,即结晶紫水试验法适用于马氏珠母贝精子膜完整性的检测。