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越来越多的证据表明,microRNA正在成为神经性疼痛发生和发展的关键调节因子。MicroRNA-15a/16(miR-15a/16)被报道在多种疾病和炎症反应过程中发挥重要作用。然而,miR-15a/16是否参与调节神经炎症和神经性疼痛的发展仍不清楚。在本研究中,我们建立了由坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)引起的神经性疼痛的大鼠模型。研究结果显示,在CCI大鼠脊髓中,miR-15a和miR-16的表达均显著上调。通过鞘内注射特异性抑制剂来下调miR-15a和miR-16的表达,可以显著减轻CCI大鼠的机械痛和热痛觉刺激。此外,抑制CCI大鼠的脊髓中miR-15a和miR-16可以下调IL-1β和TNF-α的表达。本研究中通过生物信息学分析预测,G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)是神经性疼痛和炎症的重要调节因子,是miR-15a和miR-16的潜在靶基因。在CCI大鼠中抑制miR-15a和miR-16可显著增加GRK2的表达而下调p38增殖蛋白激酶和NF-κB的活性。值得注意的是,缺乏GRK2显著逆转了抑制miR-15a/16神经性疼痛的作用。我们的结果表明,可以通过靶向抑制miR-15a/16的表达来缓解神经性疼痛的发展。这些发现为神经性疼痛的分子发病机制提供了新的见解,并为预防神经性疼痛的发生提供了潜在的治疗靶点。方法:1.坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)构建大鼠神经病理性疼痛模型。2.CCI大鼠模型的痛阈测量即动物行为学测定:热痛觉刺激的行为学测定和机械性痛觉刺激的行为学测定。3.鞘内注射miR-15a/16拮抗剂(抗miR-15a,抗miR-16,或miR-15a与miR-16的混合物)。4.用TRIzol试剂提取总RNA。采用M-MLV逆转录酶进行总RNA的逆转录。使用TaqMan miRNA逆转录试剂盒进行miRNA的检测。5.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测腰椎脊髓中IL-1β和TNF-α蛋白质浓度。6.实时荧光定量PCR对筛选得到miRNA开展进一步的鉴定。7.GRK2 3’-UTRs片段插入到pmirGLO双荧光素酶质粒中,与miR-15a/16共转染到293T细胞中。8.双荧光素酶报告系统测定荧光素酶报告活性。9.western blotting检测蛋白表达水平。结果:(1)CCI大鼠脊髓内miR-15a/16表达上调(2)抑制miR-15a/16可以缓解CCI大鼠的热痛过敏和机械痛(3)在大鼠中抑制miR-15a/16,减少IL-1β和TNF-αCCI的表达(4)miR-15a/16与GRK2的3’-UTR结合(5)抑制miR-15a/16可上调CCI大鼠GRK2的表达(6)抑制miR-15a/16抑制了p38 MAPK/NF-κB的激活(7)GRK2的下调消除了miR-15a/16抑制神经性疼痛大鼠的保护作用(8)GRK2的下调逆转了miR-15a/16对p38 MAPK活化的抑制作用结论:在神经性疼痛的发生和发展过程中,miR-15a/16通过靶向调控GRK2参与疾病发生发展。可以通过抑制miR-15a/16促进GRK2表达和抑制p38 MAPK的激活来减轻神经性疼痛和神经炎症。这些发现为神经性疼痛的分子发病机制提供了新的见解,并为进一步开发治疗和预防神经性疼痛的有效治疗策略提供了可能。