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目的:
为了了解临床分离粘质沙雷菌的耐药现状，及其对碳青霉烯类抗生素的耐药特性和耐药机制，本研究第一部分对温州医学院附属第一医院2004年至2010年临床分离粘质沙雷菌的临床分布和耐药性进行分析和统计，通过了解粘质沙雷菌的临床感染现状、耐药情况和耐药特点，为临床治疗和医院内感染的监控提供依据。第二部分收集、筛选碳青霉烯类耐药菌株，通过对主动外排系统、外膜蛋白、碳青霉烯酶检测等手段研究粘质沙雷菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制，分析耐药性与不同耐药机制间的关系，以了解本地区临床分离粘质沙雷菌对碳青霉烯类耐药的主要机制，为控制耐药性的播散提供依据。
方法:
1．回顾性调查2004年1月～2010年10月间温州医学院附属第一医院临床分离109株粘质沙雷菌的分布情况，分析其对头孢他啶、环丙沙星、阿米卡星、亚胺培南、美罗培南等抗菌药物的耐药性。
2．收集温州地区不同医院保存并存活的碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌21株，用琼脂二倍稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最低抑制浓度(MIC)。
3．主动外排机制检测：相同条件下检测并观察含与不含5μg/mlCCCP条件下菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC值的变化，PCR法检测粘质沙雷菌外排泵编码基因acrA、acrB、MexB、MexR。
4．外膜蛋白检测：对11株亚胺培南耐药株提取细菌外膜蛋白后做SDS-PAGE电泳，以2株亚胺培南敏感株作对照检测，检测有无外膜蛋白条带缺失。
5．碳青霉烯酶检测：改良Hodge试验和科玛嘉KPC显色培养基筛选KPC酶；PCR法扩增KPC、VIM、IMP、SPM-1、NDM-1、SME等碳青霉烯酶基因，并对PCR法扩增阳性株测序确定基因亚型。
6．以7株含KPC基因的粘质沙雷菌作为供体菌，大肠埃希菌EC600为受体菌进行接合转移试验，检测中KPC基因的可转移性。
结果:
1.2004年1月～2010年10月从温州医学院附属第一医院临床送检标本中共分离到非重复粘质沙雷菌109株，以痰液标本来源最多，占73.4％(80/109)，其次为尿液12.8％(14/109)、血液6.4％(7/109)、导管2.8％(3/109)和创面1.8％(2/109);标本来源科室分布不一，109株粘质沙雷茵主要来源于监护病房(ICU)37株(33.9％)、外科36株(33．O％)、烧伤科8株(7.3％)、神内科4株(3.7％)，呼吸科4株(3.7％)，占总分离菌株的81.7％，存在较明显的病区集中趋势，
2．临床常用抗菌药物敏感性试验表明：粘质沙雷菌对环丙沙星和复方新诺明的敏感性最高，为96.6％；其次为丁胺卡那霉素（敏感率95.7％）和左旋氧氟沙星（敏感率95.4％）；对呋喃妥因的耐药率最高为95.3％。值得注意的是，我院临床分离粘质沙雷菌对亚胺培南、美罗培南、厄他培南这三种碳青霉烯类抗生素均有较高的耐药率，分别是5.5％(6/109)，4.6％(5/109)和11.0％(12/109)。
3.21株碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌中有9株外排泵表型试验阳性，以亚胺培南、美罗培南、厄他培南作为底物，分别有5株、1株、5株菌在5μg/mlCCCP的条件下MIC值降低3倍或3倍以上，其中有2株菌同时对两种不同药物有明显的外排作用，外排泵对多种抗菌药物都有影响，但对不同抗菌药物的影响存在差异；CCCP在体外能不同程度地提高粘质沙雷菌对多种抗菌药物的敏感性，尤其对亚胺培南和厄他培南的敏感率分别提高了9.2％和4.2％；外排泵编码基因acrA、acrB、MexB、MexR的PCR扩增均阴性。
4.11株亚胺培南耐药株以2株亚胺培南敏感株作对照检测，未发现明显的外膜蛋白条带缺失。
5.21株碳青霉烯类耐药株中，改良Hodge试验阳性14株（检出率66.6％），科玛嘉KPC显色阳性19株（检出率90.5％），PCR方法11株检测KPC基因（检出率52.4％）；有3株产IMP型金属β-内酰胺酶（检出率14.3％）；有2株细菌产VIM型会属β-内酰胺酶（检出率9.5％）：未检出NDM-1、SPM-1、SME等耐药基因。
6.7株含KPC基因的粘质沙雷菌接合转移试验全部接合成功，提示KPC基因可以通过接合转移的方式在不同种属细菌间传播。
结论:
1．临床分离的粘质沙雷菌对抗菌药物的总体敏感性较好，但出现较高比例的碳青霉烯类抗生素耐药株，值得关注。
2．产碳青霉烯酶和主动外排是本地区粘质沙雷菌耐碳青霉烯类药物的主要机制，外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对粘质沙雷菌的MIC，尤其对碳青霉烯抗菌药物作用明显，外排泵抑制剂在克服细菌的耐药性方面有一定的应用前景。
3．编码碳青霉烯酶的耐药基因可位于质粒上，在不同菌种间通过接合等方式伟播，急需引起临床和实验室的重视。
4．本研究中没有检测到外膜蛋白的缺失，部分耐药粘质沙雷菌机制未知，需进一步探索研究。