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第一部分肝癌相关基因的生物信息学分析目的:利用生物信息学的技术来分析肝细胞肝癌的转录基因组芯片数据集以寻找出与肝癌发生发展有紧密相关性的关键基因,进而探究出肝癌发生发展的分子机制,以期寻找到可以预测肝癌患者生存的生物标记物,为肝癌的诊断和治疗提供新的方向。方法:通过在GEO数据库中下载的公开发表过的肝癌基因芯片数据集(GSE4520-3921、GSE14520-571、GSE39791、GSE57957、GSE76427)来进行肝癌发生发展的相关数据挖掘分析,应用GE02R程序筛选差异表达的基因,通过DAVID软件来进一步对筛选出的差异表达的基因进行GO功能分析和KEGG信号通路富集分析,最后利用STRING软件对差异基因所编码的蛋白质进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,找到PPI网络中处在关键位置的关键基因,并联合应用TCGA数据库来检验以上关键基因对肝癌患者生存期的影响。结果:通过生信分析我们总共筛选出151个差异表达的基因,这其中有22个差异基因上调表达,有129个差异基因下调表达。GO功能富集分析的结果显示上调差异基因及下调差异基因均在细胞外外泌体功能中富集。KEGG信号通路富集分析的结果显示上调差基因主要富集在细胞周期、PI3K-AKT信号通路、ECM受体相互作用等方面;下调差异基因主要分布在代谢通路等方面。通过对蛋白质-蛋白质相互作用网络中处于中心节点位置的关键基因的筛选并结合TCGA数据库进行生存分析的验证,最后我们发现ASPM、H2AFZ、PRC1、TOP2A、CDC20、PTTG1、NUSAP1这7个基因的表达与肝癌的总体生存率显著相关。结论:细胞周期、PI3K-AKT信号通路、ECM受体相互作用可能在肝癌的发生发展过程中起着重要的作用;ASPM、H2AFZ、PRC1、TOP2A、CDC20、PTTG1、NUSAP1与肝癌患者的不良预后相关,可作为预测肝癌患者预后的生物标记。第二部分ASPM、H2AFZ表达与肝癌肝移植预后的关系目的:肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,在我国肝癌的发病率及死亡率均较高,目前肝移植术是治疗肝癌的有效手段之一,但是肝癌患者行肝移植术后肝癌的复发率的问题仍然较高。有研究表明ASPM、H2AFZ在多种肿瘤组织中高表达,并且在肿瘤的发生和发展过程中起着重要的作用,但ASPM、H2AFZ在肝癌组织中的相关研究较少,因此本研究应用免疫组化的方法分析ASPM、H2AFZ在肝癌组织中的表达情况,并探究ASPM、H2AFZ表达水平与肝癌临床病理特征及肝癌肝移植术后患者预后的关系。方法:采用免疫组化的方法检测符合杭州标准的肝癌肝移植患者的72例肝癌组织标本和36例癌旁组织标本中ASPM、H2AFZ的表达情况,并结合临床病理资料对ASPM、H2AFZ在肝癌组织中的表达水平与患者的临床病理特征、肝癌肝移植术后的生存预后情况进行相关性统计分析。结果:免疫组化的结果显示,ASPM在肝癌组织和癌旁组织中的高表达率分别为58.3%和25.0%,差异有统计学意义(P<0.05),肝癌组织中ASPM的高表达率明显高于癌旁组织;H2AFZ在肝癌组织和癌旁组织中的高表达率分别为48.6%和13.9%,差异有统计学意义(P<0.05),肝癌组织中H2AFZ的高表达率明显高于癌旁组织。ASPM表达水平与患者性别、年龄、有无吸烟史、有无饮酒史、有无肝炎史、术前AFP水平、肿瘤大小、肿瘤数目、有无脉管癌栓均无相关性(P>0.05),而患者术后病理分化类型I-II级组和III-IV级组ASPM高表达率分别为51.0%和76.2%,差异有统计学意义(P=0.049),肝癌病理分化类型越高级,ASPM在肝癌中的表达水平则越高;而H2AFZ在肝癌组织中的表达水平与患者患者性别、年龄、有无吸烟史、有无饮酒史、有无肝炎史、术前AFP水平、肿瘤大小、肿瘤数目、有无脉管癌栓、病理分化类型均无相关性(P>0.05)。本研究中72例肝癌肝移植患者中位随访时间为29个月,其中肝癌肝移植术后复发20例,死亡8例。Kaplan-Meier生存分析表明,肝癌组织中ASPM高表达组与低表达组1年、3年、5年无瘤生存率分别为78.6%、55.5%、55.5%和86.3%、86.3%、86.3%,差异有统计学意义(P=0.036),高表达组无瘤生存率较低;而1年、3年、5年总体生存率分别为97.6%、80.6%、80.6%和93.3%、89.7%、89.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。肝癌组织中H2AFZ高表达组与低表达组1年、3年、5年无瘤生存率分别为74.3%、57.1%、57.1%和88.9%、79.5%、79.5%,差异有统计学意义(P=0.037),高表达组无瘤生存率较低;而1年、3年、5年总体生存率分别94.3%、78.1%、78.1%和97.3%、90.8%、90.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肝癌组织中ASPM、H2AFZ的表达明显高于癌旁组织中;肝癌组织中ASPM的表达水平与肝癌病理分化类型相关;肝癌组织中ASPM、H2AFZ高表达可降低肝癌肝移植患者移植术后的无瘤生存率,可作为预测肝癌肝移植患者不良预后的生物分子标记。