论文部分内容阅读
目的评价调补肺肾（补肺健脾、补肺益肾和益气滋肾）三方对慢性阻塞性肺疾病（ChronicObstructive Pulmonary Disease, COPD）大鼠的疗效及远后效应，初步探讨其治疗气道重塑的作用机制，为其临床应用提供理论依据。方法SPF级SD大鼠120只随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组。采用香烟熏吸联合细菌反复感染法制备COPD稳定期大鼠模型，第9-20周对照组、模型组给予生理盐水灌胃，其余各组分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方和氨茶碱灌胃，于第20周结束时半数取材，剩余大鼠正常饲养至第32周结束时取材。检测大鼠肺功能潮气量（Tidal Volume，VT）、呼气峰流速（PeakExpiratory Flow，PEF）、50%潮气量呼气流量（50%Tidal Volume Expiratory Flow，EF50）；观察大鼠肺与气道组织病理变化；采用免疫组化法检测大鼠肺脏及气道组织中肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）-α，白细胞介素（Interleukin，IL）-1β、IL-6、IL-8的蛋白表达；采用western blot法检测大鼠肺与气道组织中磷酸化核因子-κB（phosphorylation of nuclear factor-κB， p-NFκB）、磷酸化核抑制因子-κBα（phosphorylation of inhibitory factor-κBα, p-IκBα）蛋白表达；采用荧光定量聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术检测转化生长因子-β1（transforming growthfactor-β1, TGF-β1）mRNA、Smad2mRNA表达。结果1一般情况自第3周起，模型组大鼠均出现明显形体消瘦，精神倦怠，活动减少，皮毛发黄、进食量、饮水量减少，大便溏薄等表现，用药后，补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组及氨茶碱组上述症状均有不同程度改善，尤以补肺健脾组和补肺益肾组明显。模型组大鼠体重增长趋势明显低于对照组，补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组自第12周体重增长趋势开始加快，但各组间无显著统计学差异（P>0.05）。2肺功能模型组大鼠肺功能VT、PEF、EF50自第4周起较对照组明显降低（P<0.05，P<0.01）。补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组PEF和EF50水平自第16周起明显高于模型组（P<0.05，P<0.01），VT值于第20周起也明显高于模型组（P<0.05，P<0.01）；氨茶碱组则在第20周和第28周时PEF值开始升高（P<0.05）。在32周的观察期间，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组之间及其与氨茶碱组之间VT、PEF、EF50无显著差异（P>0.05）。第32周时，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组PEF值较第20周明显升高（P<0.05）。3肺脏病理第20周时，模型组大鼠可见明显肺与气道组织炎症性损伤及结构破坏，补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组及氨茶碱组的肺与气道组织病理表现均较模型组有不同程度改善，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组改善优于氨茶碱。第32周结束时，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组肺与气道组织损伤较第20周改善明显。4各组大鼠肺与气道组织中细胞因子表达第20、32周，模型组大鼠肺与气道组织中IL-1β、IL-8、TNF-α较对照组均明显升高（P<0.01）；补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组及氨茶碱组上述细胞因子的表达水平较模型组显著降低（P<0.01）；补肺健脾组、补肺益肾组低于益气滋肾组（P<0.01）。与第20周比较，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组第32周上述细胞因子表达均较第20周降低（P<0.05，P<0.01），其中在降低炎症因子IL-8表达方面以补肺健脾组和补肺益肾组更为明显（P<0.01），氨茶碱组无显著统计学差异（P>0.05）。5各组大鼠肺与气道组织中p-NFκB、p-IκBα蛋白表达第20、32周，模型组大鼠肺与气道组织中p-NFκB、p-IκBα蛋白表达水平均较对照组显著升高（P<0.01），补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组及氨茶碱组均较模型组有显著降低（P<0.01），补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组低于氨茶碱组（P<0.01），补肺健脾组与补肺益肾组低于益气滋肾组（P<0.01），补肺健脾组与补肺益肾组间无显著统计学差异（P>0.05）。与第20周比较，第32周，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组均有明显降低（P<0.05，P<0.01），氨茶碱组无明显变化（P>0.05）。6各组大鼠肺与气道组织中TGF-β1、Smad2基因表达第20、32周，模型组大鼠肺与气道组织中TGF-β1、Smad2mRNA表达均较对照组显著升高（P<0.01），补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组及氨茶碱组显著低于模型组（P<0.01），补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组低于氨茶碱组（P<0.01），补肺健脾组、补肺益肾组低于益气滋肾组（P<0.01）。与第20周比较，补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组第32周均有明显降低（P<0.05，P<0.01），氨茶碱组无明显变化（P>0.05）。7相关性分析第20，32周，气道壁厚度与肺及气道组织中炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α、p-NFκB蛋白、p-IκBα蛋白、TGF-β1mRNA、Smad2mRNA的表达呈显著正相关（第20周：r=0.974、0.945、0.964、0.954、0.948、0.948、0.964；第32周：r=0.977、0.974、0.980、0.971、0.963、0.954、0.968）；肺功能VT值与肺及气道组织中炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α、p-NFκB蛋白、TGF-β1mRNA、Smad2mRNA的表达呈显著负相关（第20周：r=-0.579、-0.646、-0.652、-0.598、-0.604、-0.622；第32周：r=-0.514、-0.555、-0.527、-0.474、-0.509、-0.551）；肺功能PEF值与肺及气道组织中炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α、p-NFκB蛋白、TGF-β1mRNA、Smad2mRNA的表达呈显著负相关（第20周：r=-0.487、-0.538、-0.512、-0.439、-0.378、-0.482；第32周：r=-0.504、-0.536、-0.526、-0.499、-0.498、-0.551）；肺功能EF50值与肺及气道组织中炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α、p-NFκB蛋白、TGF-β1mRNA、Smad2mRNA的表达呈显著负相关（第20周：r=-0.523、-0.638、-0.594、-0.566、-0.529、-0.589；第32周：r=-0.511、-0.548、-0.520、-0.510、-0.496、-0.548）。结论1补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方均可显著改善COPD稳定期大鼠一般情况、肺功能，减轻肺与气道组织病理性损伤，并具有良好的远后效应，疗效优于氨茶碱。2补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方可通过调节NFκB/TGF-β1/Smad2信号传导，下调相关细胞因子表达水平，减轻炎症反应，改善气道重塑，并具有良好的远后效应，疗效优于氨茶碱。3补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方中以补肺健脾方和补肺益肾方疗效更为突出。