论文部分内容阅读
背景：内皮祖细胞移植是治疗缺血性疾病的有效方法，然而采用细胞移植的方法对缺血性组织的保护作用有限，其重要原因在于EPCs移植到缺血性组织以后，细胞存活率很低，极大地限制了细胞移植的疗效。体外震波治疗是一种颇有希望的促进血管生成的方法。我们预计将体外震波治疗用于EPCs移植中，可以有效的促进EPCs移植的疗效，增加缺血性皮瓣的存活面积。目的：研究体外震波治疗在促进内皮祖细胞移植治疗缺血性皮瓣中的作用,并探讨这种联合治疗策略的作用机制。方法：通过体外培养的方法获得大鼠的骨髓来源EPCs。根据拟作用的震波的能量和次数将EPCs分成20个亚组。根据分组将不同能量和次数的ESWT作用于每组EPCs，通过检测震波处理后细胞的增殖活性、细胞因子表达以及体外成管能力的改变来研究体外震波对EPCs的功能的影响，并且以此来确定处理体外培养细胞的ESWT的最佳强度。取SD大鼠64只，分为4组：空白组，EPCs移植组，ESWT组及EPCs+ESWT组。于大鼠背部做3×10cm的随意皮瓣，将培养的自体EPCs及ESWT作用于皮瓣的中1/3，观察各治疗组的皮瓣存活情况。为进一步研究ESWT对EPCs移植的具体作用对象，再设立2个实验组：ESWT预处理皮瓣组及ESWT预处理EPCs组。采用相同的动物模型，比较皮瓣存活的差异。结果：（1）通过体外培养可以获得形态典型的大鼠EPCs，经过细胞荧光标记及流式细胞术检测证实为EPCs。（2）当用低能量震波(0.04~0.13mJ/mm2)处理EPCs后，eNOS，Ang-1，Ang-2及BCL-2的表达增加，而IL-6，FGF-2，CXCR4，VEGF，BAX，Caspase-3的表达降低；而SDF-1没有明显改变。（3）当用高能量震波(0.16mJ/mm2)处理细胞后，除了凋亡因子和FGF-2以外，大多数细胞因子的表达降低，并且细胞趋于凋亡。当震波能量在0.10mJ/mm2~0.13mJ/mm2之间、震波次数在200~300次，细胞的增殖活性最高，同时细胞凋亡因子/抗凋亡因子比值最低。（4）动物实验表明，在联合治疗组中皮瓣存活率为87.5±10.23%，明显高于其余组。组织学检查可见该组微血管密度更高，且血流灌注显著增加。皮瓣中可见大量vWF+细胞，并且趋化因子和成血管因子的表达更高。在ESWT预处理皮瓣组中，可以获得和联合治疗组相近的效果；在ESWT预处理EPCs组的效果与EPCs移植组接近。结论：ESWT可以促进EPCs的活性，从而提高EPCs移植治疗缺血性皮瓣的效果，其可能的机制是减少细胞凋亡，促进组织表达更多的成血管因子以及趋化因子，为移植的EPCs提供更有利于其生存的环境，从而在缺血组织中有效地发挥其生物学作用，促进缺血组织的存活。