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本研究工作分为三个试验:
试验一,壳聚糖硒的制备及理化性质测定。选择脱乙酰基度分别为95%、90%、85%的三种食品级壳聚糖,pH值3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0,搅拌时间2h、4h、6h、8h、10h、12h,亚硒酸钠溶液浓度0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0g/mL,研究壳聚糖的不同脱乙酰基度、pH、搅拌时间、亚硒酸钠溶液浓度对壳聚糖硒产品的硒含量及得率的影响。结果显示,脱乙酰基度为85%的壳聚糖在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0条件下制备的壳聚糖硒的硒含量分别可达4.08 mg/g、4.61mg/g、51.29 mg/g、3.93 mg/g、3.14 mg/g、3.04mg/g,得率为1.96%、2.23%、30.86%、1.85%、1.48%、1.41%;脱乙酰基度为85%的壳聚糖制备的壳聚糖硒的硒含量及得率显著高于脱乙酰基度90%、95%的壳聚糖制备的壳聚糖硒(P<0.05)。在搅拌时间2h、4h、6h、8h、10h、12h条件下制备的壳聚糖硒的硒含量分别可达27.13 mg/g、39.16 mg/g、42.68 mg/g、51.48 mg/g、52.47 mg/g、52.44 mg/g,得率为14.89%、21.68%、23.73%、28.98%、29.47%、29.43%;搅拌时间8h与搅拌时间2h、4h、6h相比壳聚糖硒产品的硒含量及得率差异显著(P<0.05),与搅拌时间10h、12h相比壳聚糖硒产品的硒含量及得率差异不显著(P>0.05)。亚硒酸钠溶液浓度为0.1g/mL、0.2g/mL、0.4g/mL、0.8g/mL、1.0g/mL、2.0g/mL条件下制备的壳聚糖硒的硒含量分别可达25.48 mg/g、37.36 mg/g、48.84 mg/g、49.19 mg/g、49.61 mg/g、50.04 mg/g,得率为14.05%、21.03%、27.31%、27.55%、27.81%、28.15%;亚硒酸钠溶液浓度0.4g/mL与亚硒酸钠溶液浓度0.1g/mL、0.2g/mL相比制备的壳聚糖硒产品的硒含量及得率差异显著(P<0.05),与亚硒酸钠溶液浓度0.8g/mL、1.0g/mL、2.0g/mL相比壳聚糖硒的硒含量及得率差异不显著(P>0.05)。
试验表明,壳聚糖与亚硒酸钠配合的最佳条件为pH 5.0、反应时间8h、亚硒酸钠浓度0.4g/mL、壳聚糖的脱乙酰基度85%。
试验二,壳聚糖硒的小鼠急性毒性试验。选择健康昆明种小鼠50只,雌雄各半,随机分为5个剂量组,分别一次性灌胃壳聚糖硒150、188.93,238.07、299.92、377.83mg/kg·bw,利用孙氏改良寇氏法计算半数致死量(LD<,50>),研究壳聚糖硒对小白鼠的急性毒性。
结果显示,壳聚糖硒的小鼠经口半数致死量为227.30mg/kg·bw,以硒计为11.52 mg/kg·bw。试验表明,壳聚糖硒的急性毒性小于亚硒酸钠。
试验三,壳聚糖硒对小鼠免疫功能及抗氧化作用的影响。选择150只25g左右的健康昆明种小白鼠,随机分为6组。1组为对照组,饲喂低硒基础日粮;2组为壳聚糖组;3组为亚硒酸钠组,在基础日粮中以亚硒酸钠的形式添加硒0.25mg/kg;4~6组为壳聚糖硒组,分别在基础日粮中以壳聚糖硒的形式添加硒0.125mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg,研究壳聚糖硒对小鼠的免疫功能及抗氧化作用的影响。结果显示,试验至60d,5组、6组的平均日增重与3组4组相比显著提高(P<0.05),与1组、2组相比极显著提高(P<0.01);6组血浆中GSH-Px活性显著高于5组(P<0.05),极显著高于1组、2组(P<0.01);6组血浆中SOD活性极显著高于1组、2组(P<0.01);1组、2组血浆中H<,2>O<,2>、MDA的含量显著高于3组、4组(P<0.05),极显著高于5组、6组(P<0.01);3组、4组、5组、6组小白鼠的脾脏指数、胸腺指数、血浆中IgG的含量与1组、2组相比显著提高(P<0.05)。
试验表明,日粮中添加不同水平壳聚糖硒能提高小白鼠的平均日增重,提高小白鼠的免疫力及抗氧化能力。日粮中以壳聚糖硒形式添加硒0.5mg/kg效果好。试验四壳聚糖硒对小鼠的硒表观消化率的影响选择40只25g左右的健康昆明种小白鼠,随机分为4组。1组、2组为亚硒酸钠组,分别在基础日粮中添加硒0.25mg/kg、0.5mg/kg;3组、4组为壳聚糖硒组,分别在基础日粮中添加硒0.25mg/kg、0.5mg/kg。采用全收粪法,研究壳聚糖硒对小白鼠的硒表观消化率的影响。
结果显示,1组、2组小白鼠的硒表观消化率分别为54%、57%;3组、4组小白鼠的硒表观消化率分别为71%、74%。试验表明,与添加亚硒酸钠相比,日粮中添加壳聚糖硒能提高小白鼠的硒表观消化率。