黑胸败血芽孢杆菌hydralysin-2的功能研究

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黑胸败血芽胞杆菌(Bacillus bombyseptieus,Bb)是家蚕(Bombyx mori)的致病菌,与同属的苏云金芽孢杆菌相似,存在一个环形质粒,大小为578kb。对质粒的序列进行分析,发现质粒上的第384位基因(GI:612493185)的氨基酸序列与绿水螅中具有昆虫专一毒性的hydralysin和苏云金芽孢杆菌中对癌细胞具有毒杀作用的parasporin-2相似,暂命名为hydralysin-2。那么,hydralysin-2是否对昆虫有专一毒性或者对癌细胞有杀伤作用?hydralysin-2作为一个毒力因子在Bb侵染家蚕或致病的过程中起作用?围绕上述两个问题,本论文的主要研究内容和获得的研究结果如下:  1.荧光定量PCR检测结果显示黑胸败血芽胞杆菌感染家蚕与生长在LB培养基中相比,hydralysin-2基因表达上调,暗示hydralysin-2可能是一种毒力因子。  2.利用SUMO融合表达技术在E. coliBL21(DE3)中表达hydralysin-2蛋白,经Ni-IDA亲和层析、SUMO蛋白酶酶切和分子筛(SephadexG-25)联用的方法纯化获得分子量大小为28 kDa的蛋白条带,MALDI-TOF/TOF-MS质谱鉴定该蛋白为hydralysin-2。  3.利用CCK8法检测hydralysin-2对昆虫细胞的毒性作用,表明hydralysin-2影响Bm-12细胞的增殖。胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测结果暗示hydralysin-2影响家蚕 Bm-12细胞膜完整性。进一步用扫描电子显微镜观察hydralysin-2处理引起Bm-12细胞表面的结构变化,发现hydralysin-2导致细胞表面出现皱缩、破损、表面微绒毛减少等现象,证实hydralysin-2对Bm-12细胞具有一定毒性作用。  4.通过注射和添食的方法测试hydralysin-2对家蚕幼虫的毒性作用,结果发现注射hydralysin-2对家蚕5龄第1天幼虫具有致死毒性;添食hydralysin-2可影响家蚕幼虫的生长发育,但不影响家蚕的生存率。  5. CCK8法检测 hydralysin-2对肝癌细胞 HepG2增殖的影响,结果显示hydralysin-2不能抑制HepG2肝癌细胞增殖活性,是否对其他的癌细胞具有抑制或杀灭作用,还有待进一步探讨。  上述研究结果表明:hydralysin-2对家蚕具有致死性,是黑胸败血芽孢杆菌对家蚕致病的毒力因子。hydralysin-2是否对鳞翅目害虫具有毒杀作用,是否具有开发新型杀虫剂的前景还需进一步探索。
其他文献
本文研究了适用于苯、甲醇烷基化反应的催化剂,主要探讨了酸浸渍改性、酸和碱处理改性在ZSM-5分子筛催化剂的应用。并用氮气吸脱附、氨气程序升温脱附、傅里叶红外变换和X射